环境中微生物的检测和分离纯化
一．实验原理
1.微生物的分离与纯化
土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。

微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。

2.平板菌落计数法
将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。

二．实验材料与试剂
1.土壤稀释溶液
2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂
棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。

三．实验步骤
（一）.无菌平板制备
1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板
（二）.周围环境中微生物的检测
2.取一平板，分成6个区，做好标记。

同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进
行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头
在六个区上涂抹。

（平板1）
3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。

（平
板2）
4.在培养基上方抖动头发数次。

（平板3）
5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。

（平
板4）
6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。

（平板5）
7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1
分钟。

（平板6）
8.取一平板，打开盖，咳几下。

（平板7）
（三）.从土壤中分离微生物
1.采土样
2.制备土壤稀溶液
3.涂布
吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟
4.培养
将培养基平板倒置于37℃下培养24小时
5.菌落计数
四．实验结果
1.平板1：从未洗到用酒精消毒总体趋势是菌落数越来越少，用自来水洗过和用洗手液洗过一遍的菌落数差不多；
平板2：旧纸币和硬币的菌落数要多；
平板3：抖头发的地方附近长出许多菌落；
平板4：自来水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“牛”字形，和当时划线的形状一样，再其次是豆浆；
平板5：划线的地方长出许多菌落；
平板6：放在试验台上的平板长出各种形状的菌斑菌块，在酒精灯旁的基本没有菌落；
平板7：咳几下的基本没有菌落。

2.
三张平板均被大片菌苔完全覆盖，无法计数。

五．实验讨论
1.有关洗手液我了解到大部分洗手液都只有杀菌而没有除垢作用，因为其中含有60%到
70%的酒精，酒精含量低于60%，杀菌效果会很差，我们用的洗手液可能是酒精含量偏低，所以只用洗手液洗手是不够的。

最好的洗手方法是，先用肥皂洗手去除污垢，再使用洗手液杀菌润肤。

钱上有很多细菌，少接触，勤洗手。

经查阅有关资料我了解到，牙垢中的细菌主要是正常口腔内存在的链球菌、厌氧菌等。

牙垢堆积到一定厚度之后，其内部紧挨牙齿表面的细菌因为与空气隔绝开始转入无氧呼吸。

无氧呼吸在此处产生的酸不能及时被唾液冲走，因此会腐蚀珐琅质中的矿物成分，并进一步促进龋齿的形成。

在牙根处堆积的牙垢也会刺激牙龈，导致牙周炎等牙周疾病。

所以要饭后刷牙。

空气中有多种多样的细菌。

咳几下没有细菌的原因可能是没有使口腔中喷出的气流或飞沫落到培养基上。

2.第二个实验失败的原因可能是滴加的溶液过多，或是取液位置不对细菌浓度很大。