目的：建立Quattro Micro API液质联用仪标准操作规程，指导操作人员的正常使用和维护保养。

范围：适用于质量检验、技术培训的全过程
责任人：实验室管理负责人
执行：质监部所有人员、技术部所有人员
监督管理：质检部所有人员、技术部所有人员
一、准备
流动相：配制所需流动相，并且放入超声波中脱气10分钟以上。

标准或样品：按要求对样品进行前处理，配制好标准。

检查：检查氮气压力，气源压力不低于6-7bar(相当于0.6-0.7Mpa)。

检查质谱后机械泵中的泵油不得低于最低线。

检查电源是否连接好。

二、开机
打开液相色谱（仪器左侧右上角）和质谱电源（仪器底部）开关。

打开计算机。

仪器完成自检后，双击计算机屏幕上MassLynx图标。

液相部分
1. 换上所需流动相：
管路A：可换为无机盐溶液或水；
管路B：请保持为甲醇；
管路C：可换为乙腈；
管路D：其他有机溶剂。

2. 控制面板上显示Idle，进入面板控制模式。

按Menu/Status键，进入主显示屏“Status （1）”界面。

3.通过方向键，把主显示屏上的亮白条移到“Degasser”的“Mode”“Off”按“Enter”键，选为“On”，再按“Enter”，打开脱气开关。

4.把亮白条移到“Composition”，设定所用其中一个流动相（例如A）的比例为100％，
“Enter”回车后，再按右下角“Direct Functions”键，出现另一对话框，选择“Wet Prime”，设定流速和时间（5mL/min，3min即可），按“OK”键，排出管路气泡。

结束后，在“Composition”中移动亮白条，依次设定所用的其他流动相B、C、D为100％，重复上述操作。

5. 同样，在主显示屏上设定流动相A百分比为100％，进入“Direct Functions”对话框，选择“Purge Injector”，按“Ok”。

之后依次设定流动相B、C、D，重复此操作。

6. 设定流动相比例：把亮白条移到“Composition”，依次设定所用流动相A、B、C、D的百分比，按“Enter”。

7.将柱温箱打开，换上所用色谱柱（注意色谱柱流向），将二极管阵列检测器（PDA）的“out”出口接废液瓶；如未使用PDA，可直接将柱子流出端的PEEK管接废液瓶。

把亮白条移到“Col Htr”，设定柱温，按“Enter”。

8.把亮白条移到“Flow”处，设定流速，按“Enter”，此时开始平衡柱子（一般10倍柱体积）。

质谱部分
1. 进入MassLynx页面后，点击左边MS Tune进入质谱控制页面。

2. 点击Options出现下拉菜单，选择“Pump”开始抽真空。

待真空达到一定状态可以进行实验。

3.点击Tune页面右下角Press for Operate，待灯变绿，点击Gas提供脱溶剂气和锥孔气（注意不要在source temperature低于100℃时关闭气体）。

4.用标准进行质谱调谐，优化质谱条件。

通过调节“ES＋Source”和“Analyser”中的各项参数使得质谱峰信号达到最强。

三、设定方法
液相方法：点击左侧“Inlet Method”图标编辑液相方法。

点击进入“Inlet”页面设定各项参数。

在“Solvents and Flows”窗口设定流动相比例和名称，设定流速和程序运行时间；“Column Setup”中设定柱温；在“Pump Gradient”窗口设定梯度。

点击“File>Save As….”保存方法（·····.wat）。

点击Change Mode图标切换至计算机控制模式，液相面板上显示为Remote。

点击“Load M ethod”开始运行液相方法。

质谱方法：点击左侧“MS Method”图标编辑质谱方法。

有五种方式可供选择可选择。

点击“MS Scan”为全扫描模式：设定质谱扫描开始和终止范围、扫描时间、Cone值和离子源模式以及数据显示模式等；
“MRM Scan”为选择离子模式：设定选择的母离子和子离子、驻留时间、Cone值和Collision 值、扫描间隔和回扫时间、狭缝宽度、重复次数数据显示等
“ Daughter Scan”为子离子模式、“ Parent Scan”是母离子扫描模式、“Neutral Loss“中性丢失，设定参数同上。

四、编辑样品列表-运行序列
4.1 在Masslynx主页面下编辑样品运行所需的文件和参数。

样品列表如下：
File Name File
Text MS
File
Inlet
File
Bottle Inject
Volume
Sample
Type
Compound A
1 样品名称样品描
述质谱
文件
LC文件瓶号进样体积样品类型化合物浓度
4.2 将标样和待测样品装入进样小瓶后，放入样品盘中（有A、B、C、D、E五个盘），记录每一样品相对应的盘号；
4.3编辑完毕，点击“File”菜单选择“Save或Save As”，设定样品序列名称（····.spl）。

4.4 运行序列：检查N
2
、Ar气路， PDA开关、液相与质谱连接、质谱高压开关是否均已打开和连接好，当质谱调谐页面各参数已经达到设定值，液相基线已经平稳，此时选中要检测的样品号（整个横栏变黑），点击Masslynx主窗口工具栏中绿色三角图标（Start Run），在弹出窗口点选“Acquire Sample Data”，检查运行的样品号无误后，点击“OK”确定，开始运行样品序列，自动进样开始。

五、显示图谱
点击Masslynx主页面上的“Chromatogram”可察看流出的色谱图和质谱图。

用右键在色谱图上选中出峰的起始位置，也可点击工具栏中的或（扣背景）图标均可以看其质谱图；
工具栏：点击图标可进行实时监控；点击图标表示还原图谱；
图标表示复制图谱；图标表示对谱图进行积分处理。

六、关机
质谱部分：关闭高压（点击press for operate），设置源温source temp 为20℃，待温度下降后点击调协页面上方的API GAS图标停止吹N2，关闭高纯氮气安全阀
光谱检测器：关闭PDA检测器电源；
液相部分：把液相与质谱连接的管路拧开，按Menu/Status键切换成手动控制模式，换上适当的清洗溶剂，冲洗管路，一般先用水/有机溶剂，再用纯的有机溶剂冲洗；
当长时间停电或移机时必须关机，点击质谱Tune page-Options下拉菜单中的Vent选项，释放真空，待真空压力表指针回到零方可关闭质谱电源。

质谱和液相关机完成，最后关闭计算机及显示器电源。

七、注意事项
7.1 对ESI接口来说，最佳工作流速为100-250 mL/min，一般采用内径为1.0-3.0mm内径的色谱柱，如果采用常规色谱柱，则需要分流。

APCI流速范围大，从 0.2 到2.0mL/min ，而不用分流。

7.2 ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应；三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强的[M+H]+峰，有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应；四氢呋喃（THF）易燃，当使用空气为雾化气的时候，不能用于APCI。

7.3 要避免使用非挥发性的盐(phosphate, borate, citrate, etc.)；表面活性剂，清洁剂和去污剂 (会抑制离子化)；以及无机酸(sulphuric acid, phosphoric acid etc.)等。

7.4 连接HPLC泵，LC色谱柱，注射泵以及ESI探头时，要将仪器置于standby状态。

7.5 当改变分辨率的时候，仪器的质量数也会有轻微的偏移，所以在不同分辨率的条件下，应该做质量数校正。

7.6 样品贮存在塑料离心管中，其中的添加剂很容易混入，尤其是被有机溶剂浸泡时间较长时，会产生干扰物信号。

7.7 工作站计算机不要安装与仪器操作无关的软件，要经常清理计算机磁盘碎片，定期查杀病毒，定期备份实验数据。

八、维护与保养
8.1 LC/MS/MS仪器应定期检查，并有专人管理，负责维护保养。

8.2 实验完毕要清洗进样针，进样阀等，用过含酸的流动相后，色谱柱，离子源都要用甲醇/水冲洗，延长仪器寿命。

8.3定期清洗样品锥孔，关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸（45：45：10）的溶液超声清洗10分钟，然后在分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟，待晾干后再安装到仪器上。

当灵敏度下降时，需要清洗Source、二级锥孔和六级杆。

8.4定期（对于ESI源，至少每星期做一次；对于APCI源，每天做一次）逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟。

定期（每星期）检查机械泵的油的状态，如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，要及时更换机械泵油。