小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象 大吞噬实验
鸡红细胞
瑞式染色
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
Chick erythrocytes
M Φ
操作：小吞噬（中性粒细胞对小颗粒物质 的吞噬）
• 原理：血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调 理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细 胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成 部分。 • 材料：1.葡萄球菌菌液 2. 抗凝人血（3.8%枸橼酸钠）、瑞氏染液、双蒸水 3. 酒精棉球、香柏油 • 器材：采血针1根/人，棉签3根/人， 载玻片1张/人，双凹片2张/2人， 抗凝剂1支/桌，细菌1支/桌， 酒精灯1个/2人，接种环1个/2人。
加工、递呈抗原
免疫调节
在机体防御和来源于细菌等感染性微生物的免疫应答中 发挥重要的作用
吞噬过程
示教片
• 大吞噬:单核巨噬细胞吞噬大颗粒异物
示教片 大吞噬现象
1、淀粉溶液注入豚鼠腹腔内
2、次日再注入淀粉溶液，1小时后腹腔注入鸡血球 悬液 3、血球注入后1小时吸取豚鼠腹腔液，瑞氏染色 4、油镜观察，可见巨噬细胞内吞噬有鸡血球
无菌观念
严格贯彻“无菌概念”的培养和训练，严格实施 “无菌操作”。 实验中如发生意外，如菌液洒在桌面或含活菌的 实验器材损坏使细菌溢出，污染衣物手指等，应 立即报告老师，及时进行消毒处理。 吸过菌液的吸管等要放在0.1%新洁尔灭溶液中， 不得放在桌上，更不可冲洗于水槽内。用过的带 菌玻片也应放于含消毒液的容器内。
微生物与免疫学实验
• 主要内容：实验室规则 • 免疫细胞 • 油镜的使用 • 示教片 • 操作 • 作业
实验室规则
• 一般规则 • “无菌”安全：穿白大衣 不能吃东西 禁止追跑打闹 物品按指定地点存放 肥皂洗手，消毒液泡手
实验室规则
1、只带书籍、文具等实验相关物品进入实验室。
2、必须穿工作衣，离室时脱下并反折。 3、严禁在实验室吃东西，不得随地吐痰。 4、实验中不得随便走动，应保持安静、有序。 5、实验器材使用后按要求摆放，有菌的器材按要求浸泡 于消毒液中。实验器材如有损坏，及时报告并登记。 6、实验完毕应打扫实验室卫生，关闭门窗水电，洗手清 洁后方可离室。
单核巨噬细胞
• 包括骨髓内的前单核细胞，外周血
中的单核细胞和组织内的巨噬细胞。
•
骨髓内中的髓样干细胞受某些细胞 因子的作用发育成前单核细胞。前 单核细胞进一步发育成为单核细胞 进入血流。然后移行至全身各组织 器官内，发育成熟为巨噬细胞。
重要功能：
吞噬杀伤作用
参与和促进炎症反应
杀伤靶细胞
• • • •
步骤
• 洗手 消毒 扎手指（一针见血） • 一滴抗凝剂 双凹片 2滴血，用针混匀 • 点酒精灯 取菌环烧3次 取3～4环菌液 加入血中用取菌环混匀 温育（37度）30 分钟 推片（慢、厚） 自然干燥 • 加瑞氏染液2滴1分钟 加缓冲液4滴（染液 与缓冲液比为1：2） 混匀 染10分钟 冲洗 吸干 油镜观察 *纸 入盆，双凹片、针 入瓷缸（前面）， 油片 入玻璃缸（后面） 泡手
免疫细胞
吞噬细胞
——大吞噬细胞
（单核巨噬细胞吞噬大颗粒异物）
——小吞噬细胞
（中性粒细胞对小颗粒物质的吞噬）
大、小吞噬细胞 •大吞噬细胞－巨噬细胞 •小吞噬细胞－中性粒细胞
中性粒细胞（小吞噬细胞）
• 存在部位：血液、炎症部位（全身），是白细 胞中数量最多的一种。 • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。 • 作用：趋化作用 吞噬功能 • 功能：主要吞噬化脓菌 • 反应时间及寿命：反应时间快， 数分钟到几小时，寿命短， 平均数小时。
瑞氏染色法
•
•
• • • •
1.瑞氏染料 由酸性染料伊红（E-）和碱性染料亚甲蓝（M+）组成。伊红通常为钠盐，有色部分为阴离 子。亚甲蓝（又名美蓝）为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化 美蓝，有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料（即天青）。将适量 伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形 态。 2.染色原理 既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲 和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为 嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合， 染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色， 称为嗜中性物质。 原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含 酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成 粉红色。
实验报告
画图：
• 大吞噬（巨噬、 鸡红细胞） 小吞噬（中性粒、 细菌、 红细胞及其他细胞） 小吞噬实验方法 注：画图要注意视野、比例、颜色、背景、标注
纸入盆，双凹片、针入瓷缸（前面），油片入玻璃缸（后面）, 泡手
油镜的使用
• 保护：拿取手式 • 对光：升聚光器 打开光栅 反光镜采光 • 观察：标本固定载物台上 低倍镜找到标 本 低倍镜移开 滴香柏油 换油镜 目 镜观察，细调至清晰 • 使用完毕立即用擦镜纸擦干镜头上的油 • 原理Fra bibliotek结果观察
油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染色结果正确，可见细胞核 及被吞噬的细菌染成紫色，而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
3.pH的影响 （pH6.4～pH6.8） 细胞各种成分均属蛋白质，因蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环 境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色； 在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗 褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则 可导致细胞染色呈色异常，形态难以识别，甚至错误。 4.染色方法和注意事项 （1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。 （2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过 久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。