从链霉菌CS495中分离新的碱性几丁质酶
摘要:从韩国的土壤中分离了一种链霉菌CS495，从中的到一种碱性几丁质酶。

通过一步层析纯化和生化鉴定。

通过Sepharose Cl-6B柱纯化7倍，收率为33.9%。

酶的分子量为41KDa,同时发现其具有稳定的pH范围（5-12.5）最佳温度60℃。

最大反应速率和米氏常数为1.34±2.9 mg/mL 和889±3.6 mmol/min。

N-端序列为APREKINLLYFLGYF。

HPLC和TLC分析显示产物中N-乙酰葡糖胺是次要的产物，二乙酰基壳二糖是主要产物。

产物对腐皮镰刀菌和曲霉菌属显示具有抗菌活性。

因为，作为纯化产物，极端嗜碱，稳定广泛的pH范围内，能以产生寡糖，和抗真菌活性，Ch495具有潜在的应用在行业作为医疗益生元或用于农业致病菌的生物防治。

前言：
几丁质分解酶，几丁质酶已被广泛的发现存在很多生物中，如真菌，甲壳类，和昆虫以及无几丁质的生物，像古细菌，细菌，病毒，高等植物，动物和人类。

最近，细菌几丁质酶已被广泛用于抑制真菌生长，可以有效地控制植物致病真菌引起的疾病。

真菌抑制作用的原因是几丁质酶在真菌细胞壁作为植物保护剂。

几丁质酶，作为有前途的生物防治剂，无论是直接作用于真菌细胞壁或增加植物对疾病的响应已早已报道从链霉菌M-20[7]，链霉菌cyaneus SP-27[8]，委内瑞拉链霉菌P10[9]，链霉菌DA11[10]。

在这里，我们描述了一种有效的几丁质酶的分离和鉴定生产菌-链
霉菌CS495。

此外，纯化单步柱层析，产物对腐皮镰刀菌和曲霉菌属显示具有抗菌活性。

材料和方法：
材料:几丁质，乙二醇壳聚糖，TLC硅胶板，壳二糖，壳三糖，Sepharose Cl-6B，F.solani and A. brasiliensis菌株，生长条件，筛选：从不同的地区收集了15种菌株，几丁质培养基培养，pH6.5,0.5%的胶状几丁质，0.5%的酵母膏，1%的胰蛋白胨，0.07%KH2PO4, 0.03% K2HPO4, 0.4% NaCl, and 0.05% MgSO4. The strains were cultivated in 250 mL Erlenmeyer flask containing 50 mL medium at 28 ◦C and 110 rpm for 7 days. 离心at 6000×g for 30 min and上清液was used to determine the enzyme activity.
酶活和蛋白质分析:
酶的纯化：
所有的纯化过程在0℃进行，菌株CS495培养7天，上清液离心6000,1小时。

粗样通过30-80%进行硫酸铵分级沉淀。

6000rpm；离心1h使蛋白质得到回收。

使用10mM Tris/HCI（pH7.0）透析。

然后用超滤进行过滤（5kDa）,透析的酶溶液，装样入Sepharose CL-6B column(85 cm×1.7 cm)平衡用10mM Tris/HCI（pH7.0）蛋白质洗脱流速为30ml/h.几丁质酶的活性部分富集，进行纯度分析。

然后进行特性分析。

电泳：
pH和温度的影响：
金属离子的影响：
氨基酸的N-断序列:
底物专一性和动力学参数：
保质期：
抗真菌活性：
几丁质水解作用：
结论：酶的产生和纯化：酶被纯化7倍，产率为33.9%。