叶绿素测定方法
一、方法选择
1、分光光度计法>荧光光度法>SPAD速测法，浸提比色法>萃取比色法，常温浸提比色
测定>高温速浸提比色法，如果时间条件允许，建议选择常温浸提比色法。

2、药品的选择，常用有机浸提叶绿素的试剂由甲醇、乙醇、丙酮，乙醇对身体的伤害
最小，丙酮最厉害，如果通风条件不是太好，建议选择乙醇;有机试剂混合液提取具有
协同优势，乙醇与丙酮的混合液比甲醇与丙酮的混合液(甲醇乙醇混合很少)浸提的要
完全，而且稳定，乙醇、丙酮、水的浸提效果次之，差异不显著;综上，如果能买到丙
酮的话，乙醇、丙酮以1:3的比例混合液提取最好，其次是乙醇、丙酮、水以4.5:4.5:1
的比例混合液，如果不想用丙酮，可以用95%的乙醇代替，但是与混合液比，提取效率
不高。

3、称样量，0.2g样品，选用20ml浸提液浸提，0.5g样品，选用50ml浸提液浸提。

二、实验原理
分光光度法测定叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量) 含量的原理是，以有机溶剂在常温暗室直接提取样品中的叶绿素，测定其吸光度，根据叶绿素(包括a\b\类胡萝卜素\总量)在特定波长的吸收，用公式计算其含量。

三、器材
棕色容量瓶、721型分光光度计(751型分光光度计更好，越精确越好) 四、步骤
1、将叶片洗净，选取中间部分，称0.200克左右，并剪成2mm左右碎条
2、将样品放入容量瓶中，加入浸提液，定容，放在暗处26h左右
3、比色，如果仅仅测定叶绿素A\B总量，测定波长在665nm、649nm、652nm 处吸光
度即可，如果还测定类胡萝卜素含量，再测定处波长在470nm处的吸光度即可。

目
前，不同的浸提液提取方法都是在这些波长下测定的。

4、每个实验样品重复三次，空白两次重复即可(本实验中空白意义不大)
五、计算
Ca=13.95*A665-6.88*A649
Cb= 24.96* A649-7.32* A665
C类胡萝卜素= (1000*A470-2.05* Ca -114.8* Cb)/245
C总= A652*50/(34.5*m)
Ca 为叶绿素a的浓度
M 为称样量。