加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中， 并均匀地涂布在整个圈内


加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原
反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下观察结果
60滴/mL，1滴=17ul
非梅Байду номын сангаас螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验

稀释夜准备：在反应纸板圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定圈数),勿将盐水涂开 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗
后
• 一期梅毒1年后转为阴性
•
•
二期梅毒2年后转为阴性。
晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后
约50%病人血清反应仍为阳性。
非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义
• 非梅毒螺旋体抗原血清试验方 法简单、快速、敏感性和特异
梅毒 病期 敏感性 (%)
（3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。
• 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇
• 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒 被肉眼所见 • 上述方法的敏感性和特异性都基本相似
非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速？转 幅？
2、定性试验

•
梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
TPPA
• TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与人血清
中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反
应，具有较高的敏感性和特异性。
•
TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验
问题：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试 验在梅毒诊疗中有意义吗？
梅毒螺旋体抗原血清学试验方法
• • 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)
梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)
梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）
化学发光免疫分析法（CLIA）
•
•
•
•
梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)
荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）
加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，
并均匀地涂布在整个圈内

加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：水平旋转仪旋转8分钟(23 ℃ -29 ℃） ， 亮光下观察结果 ？滴/mL，1滴=？ul
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
1、仪器：水平旋转仪，转速、转 幅
100r/min 约18mm 2、定性试验
常用梅毒实验室检测方法
• 病原学检测 • 血清学检测
病原学检查
• 原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁
平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿
刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线 从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而
发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式
进行检测。 • 方法：（1）暗视显微镜检查
HIV抗体检测
• 筛查试验 酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光或免疫荧光试验 快速检测（RT） • 确证试验 免疫印迹试验（WB） 条带免疫试验 放射免疫沉淀试验（RIPA） 免疫荧光试验（IFA）
样品
筛查试剂
初筛试验
阳性反应
阴性反应
初筛和复检流程
均阳性反应
原有试剂+另一不同原理 （或厂家）试剂或另外两种 不同原理（或厂家）试剂
复检试验
一阴一阳
均阴性反应
确证试验
图 1 HIV 抗体筛查检测流程
报告阴性
确证流程
质量控制
• 试剂盒内部对照 ：按照试剂盒要求设臵 • 使用室内质控品：外购、阳性对照/样本稀释 • ELISA检测 20次内—即刻法质控 20次后， Levey-Jennings质控图 更换试剂厂家必须重新制作质控图， 同种试剂不同批号可继续使用（注明批号） 发现失控、位移及时查找原因，必要时重新开始质控 • 快速检测 更换批号进行质量验证 注意反应时间、温度、数量控制
实验室生物安全
• 实验室：Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2） • 建立安全制度：S-SOP、意外事故处理预案、 信息安全及保密制度 • 培训和管理：全员培训、标准防护原则 • 个人防护：防护用品与设施、健康监护 • 安全操作：样品采集与管理、仪器设备使 用、利器使用 • 消费与污物处理
梅毒实验室检测技术
实验室记录
• 检测登记表 • 试验原始记录（ ELISA、快速、RPR/TURST ） • 报告单/化验单 复检化验单—筛查阳性填写，信息收集完整 • 仪器使用、维护保养记录 • 质控资料 • 消毒记录 • 废弃物处理登记 • 冰箱温度记录 • 人员健康档案（体检、疫苗接种记录，化验单、体检报告）
生物学特性-2
• 反应素：TP破坏机体组织，使组织释放一 种抗原性心磷脂,以及螺旋体自身的磷脂类 物质，可以激发机体产生反应素，能同从 动物如牛心肌中提取的心磷脂发生反应， 通过试验来检测。 反应素水平与梅毒感染过程相平行， 抗梅治疗后约半年转阴，但反应素并非感 染TP后所特有。
生物学特性-3
• 致病性：自然条件下TP只感染人，尚未证明梅毒 螺旋体能产生内毒素和外毒素，致病机理尚不清 楚。 • 传染性：感染早期传染性最强，随着病程的延长 传染性越来越小。临床上未经治疗的病人，在感 染后1～2年内最具有传染性，一般认为4年以上几 乎不通过性接触传染，但保持对胎儿的传染性。 • 抵抗力：TP在体外仅能存活数小时，40℃时失去 传染力，煮沸立即死亡；对干燥特别敏感，一般 的消毒剂均能容易将其杀灭。血库的血液和血浆
抗体）。 • 未经治疗的病人，其血清内的非特异性抗体可长期存 在。经正规治疗后，非特异性抗体可以逐渐减少滴度 至转为阴性。
问题： 临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什 么需要做定性和定量两种检测方法？
非梅毒螺旋体抗原血清学原理
• 方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)
（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
86（77-99）
特异性 (%)
一期 二期 隐性
-
性较好。适用于大量人群的筛
查。
100
98(95-100)
（一般滴度>1:8， 但不排除<1:8）
• 因治疗后血清滴度可下降并阴
复发或再感染的指征。
晚期
73 98(9399)
性，故可作为疗效观察、判愈、 非梅
毒
非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点
假阳性反应
问题：定量试验血清稀释需要使用试管吗？
1:4 1:8 1:16
？
1:2
定量试验结果判断 血清稀释度
结果 1:16 ？ 1:2 1:4 1:8
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
+ + +
+ +
+
+
-
？ ？ ？
问题：定量试验原倍血清滴度是多少？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点
3、定量试验
生物学特性-1
• 免疫性：人对TP产生细胞免疫和体液免疫。 细胞免疫对感染过程的影响尚不清楚。 • 特异性抗体：TP可导致人体产生多种抗体。 其中 TP的脂质激发机体产生的特异性抗 体，在初次感染后产生，保持终生，但对 清除机体内的TP无作用。另一些种特异性 抗体可与很多种非致病性螺旋体发生交叉 反应。
• 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳 性反应，经过重复试验即可排除。 • 生物学假阳性反应(一般滴度小于1:8），应采用梅 毒螺旋体抗原血清学试验如TPPA等进行排除。
假阴性反应：前带现象、后带现象
血清固定：临床问题
梅毒螺旋体抗原血清学试验原理
• 抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋 体重组特异抗原），检测梅毒患者血中 特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 • 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗 体试验呈阳性，则患者终身阳性。
（2）镀银染色法
（3）核酸检测（血液标本？） 注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功， 仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。
病原学检查的临床意义
• 螺旋体检查是诊断早期梅 毒的最佳方法，对于患者 的早期诊断、及时治疗、 预后和尽早切断传染源都
有十分重要的意义。
• 如未见到梅毒螺旋体，并
不能排除患梅毒的可能性。
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非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断
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RPR 1:256
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TRUST 1:16
梅毒血清学检测方法
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验
（非特异性梅毒抗体）
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验
（特异性梅毒抗体）两类方法。
问题： 为什么梅毒诊断需要上述两类血清学检测方 法？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理
• 梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂
质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性
宿
主
• 梅毒螺旋体只感染人类 • 人是梅毒的唯一传染源
传播途径
性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染 性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后4年，通过性接触一般无传染性 母 婴 传 播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传 染（未经治疗者），病期>4年虽已无性传播， 但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性 越小;