的
大
学
3．测量未知试样色谱图上各组分的峰高h，半峰宽Y1/2，
通 用
计算各组分的峰面积A及其含量wi，并将数据列于下表中：
化 学
实
验
出峰 顺序
组分
峰高
h/mm
半峰宽
Y1/2/mm
峰面积
A
含量
wi%
技 术
7/13
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对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
的
大
学
通
103.6 注意事项
用
化
（1）严格按照规定使用仪器，防止因错误操作造成 学
实
仪器损坏。
验
技
（2）流动相使用前应用微滤膜过滤并充分脱气。
术
（3）样品溶液若不清澈透明，应用微滤膜过滤。
8/13
（4）实验结束后，应冲洗色谱柱30 min以上。
对 反羟
相基
高苯
效甲
液酸
相酯
色类
谱混
分合
析物
的
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四只10 mL容 量瓶
混匀 备用
对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
的
大
色谱条件：
学
(1)色谱柱
长25 cm、内径3 mm 装填C-18烷基键合相
通 用 化
粒度为10 μm的固定相
学
实
验
(2)流动相
甲醇︰水=55︰45流量
技
1 mL·min-1
术
4/13
(3)检测器
紫外光度检测器检测波长
的
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大
学
103.8 参考答案
通 用
（1）色谱定量分析采用归一化法定量有何优缺点?本
化 学
实验为什么可以不用相对质量校正因子?
实 验
答：归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件
技 术
如进样量、流速等变化时，对结果影响小。但若试样中 10/13
对 反羟
相基
持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物的各组分
高苯 效甲
液酸
保留时间，与已知纯酯类备组分的保留时间进行对照，
相酯 色类
谱混
即可确定未知物中各组分存在与否。
分合 析物
的
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大
学
通
本实验采用归一化法定量，归一化法使用条件及计
大
学
103.5 实验数据记录与处理
通
用
1．记录实验条件
化
学
2．测量四种对羟基苯甲酸酯化合物标准溶液色谱峰的
实
验
保留时间tR，并填于下表中：
技 术
组分名称
保留时间tR /min
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对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
254 nm
对
反羟
(4)记录仪
量程5 mV
相基 高苯 效甲
走纸速度480 mm/h
液酸 相酯
色类
(5)进样量
3 μL
谱混 分合 析物
的
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大
103.4 实验步骤
学
通
用
1.
配制好的流动 相甲醇水溶液
置于 脱气15 min
超声波发生器
大
学
103.7 问题讨论
通 用
化
（1）色谱定量分析采用归一化法定量有何优缺点? 学
实
本实验为什么可以不用相对质量校正因子?
验
技
（2）本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由。 术
（3）高效液相色谱分析的流动相为何要脱气，不脱 9/13
气对实验有何妨碍？
对 反羟 相基 高苯 效甲 液酸 相酯 色类 谱混 分合 析物
化 学 实
验
技
2.
仪器
根据实验条件
调节至进样状态
术
按照仪器的操作步骤
5/13
待仪器达到平衡时 记录仪基线
即可进样
对 反羟
呈直线
相基
高苯
效甲
3. 依次分别吸取3 μL的四种标
记录各色谱图
液酸 相酯 色类
准操作液和未知试液进样
谱混
分合
析物
的
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液酸 相酯
色类
正己烷。
谱混 分合
析物
的
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大
学
通
用
（3）高效液相色谱分析的流动相为何要脱气，不脱
化 学
气对实验有何妨碍？
实 验
答：流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影
技 术
响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作； 12/13
用 化
算公式，与气相色谱分析法相同。而对羟基苯甲酸酯类
学 实
混合物属同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它
验 技
们在紫外光度检测器上具有相近的校正因子，可用下式： 术
2/13
wi
Ai
n
100 %
对 反羟
Ai
相基 高苯
i 1
效甲 液酸
相酯
色类
谱混
分合
析物
的
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的组分不能全部出峰，则不能应用此法。本实验样品为
对
同系物，若各组分的相对校正因子值相近，所以可以略

相酯
色类
谱混
分合
析物
的
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大 学 通
（2）本实验为什么采用反相液相色谱，试说明理由。 用
化
答：流动相极性大于固定相极性的色谱称为反相色 学
实
谱，反之称为正相色谱。本实验所用样品均为极性化合 验
技
物，依据“相似相溶”原则，宜选用极性固定相、非极 术
性的流动相，即选择正相色谱。但是，高效液相色谱的 11/13
可贵之处是它的分离效能很高，对于极性化合物往往用 对
反羟
反相色谱也能实现很好的分离，而且，反相色谱的流动
相基 高苯
效甲
相通常使用甲醇和水，价格远低于正相色谱通常使用的
103.3 实验条件
溶液的配制 (1)标准贮备液：
配制浓度均为1000 μg·mL-1的上 述四种酯类化合物的甲醇溶液
(2)标准操作液：
大
学
通
用
化
学
实
验
四只100 mL容
技
量瓶
术
3/13
上述四种 标准贮备液
(3)未知样品
配制浓度均为10μg·mL-1的 四种酯类化合物的甲醇溶液
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另外，如果在检测器中产生气泡，会造成基线波动或异
对
常出峰。
反羟 相基
高苯
效甲
液酸
相酯
色类
谱混
分合
析物
的
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大
103.2 实验原理
学
通
对羟基苯甲酸酯类混合物中含有强极性化合物对羟
用 化
基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯
学 实
和对羟基苯甲酸丁酯，可采用反相液相色谱进行分析，
验 技
选用非极性的C-18烷基键合相作固定相，甲醇的水溶液 术
作流动相。
1/13
由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保