常用溶液的配制一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g蒸馏水加至1000ml乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3%台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂酚红 0.5g0.1N(0.4%)NaOH 15ml双蒸水 85ml将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)(五)10μg/ml秋水仙素秋水仙素 lOmg生理盐水 100ml装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
(九)0.5%醋酸洋红(Aceio Carmine)染液洋红 lg醋酸 90ml蒸馏水 110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。
室温保存。
加铁使洋红沉淀于组织而着色。
此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。
(十)1%甲苯胺兰(Toluidine blue)称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。
(十一)1/3000中性红染液取中性红(Neutral red)0.1克,加蒸馏水300ml。
室温保存。
(十二)Giemsa染液1.贮备液Giemsa粉 1g纯甘油 66ml甲醇 66ml先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。
再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。
一般两周后使用为好。
2.工作液临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液苏木精 1.0g乙醇 50ml醋酸 5ml甘油 50ml硫酸铝钾 5g蒸馏水 50ml将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液(一)M一缓冲液眯唑(Imidazole) 3.404gKCI 3.7gMgCl2·6H2O 101.65mgECTA 380.35mgEDTA 29.224mg巯基乙醇 0.07ml甘油 297ml蒸馏水加至1000ml用lNHCl调pH至7.2室温保存。
(二)2%Triton X一100溶液量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml即可。
(三)0.2%考马斯亮兰R-250染液甲醇 46.5ml醋酸 7.0ml考马斯亮兰 0.2g蒸馏水加至100ml(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)1.0.1%固绿水溶液固绿(Fast green) 0.1g蒸馏水 100ml2.0.05%Na2C03溶液Na2C03 50mg蒸馏水 100ml用时按1:1体积混合即可。
B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)1.0.1%固绿水溶液。
2.mol/L×75盐酸液盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml用时按l:1混合。
(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):(1)醋酸 17ml蒸馏水加至200ml(2)醋酸水 13.5g蒸馏水加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2.甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)5%哌咯宁水溶液 6ml2%甲基绿水溶液 6ml蒸馏水 16mllmol/L醋酸缓冲液 16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
(六)Schiff试剂将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。
次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。
过滤后即得Schiff试剂。
避光低温保存。
(七)联苯胺混合液联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g95%乙醇 lOOml3%过氧化氢 2滴此液临用时配制。
(八)l%番红水溶液番红(Safranin) 1.0g蒸馏水 100ml(九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)SDS 10g45%乙醇 100ml(十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8 Tris 12.114g蒸馏水 lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml(十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用0.65克) 0.9克氯化钾 0.042克氯化钙 0.025克蒸馏水 100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白 2g淀粉 6g牛肉汤 100ml用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液蔗糖 85.5g氯化钙 0.33g蒸馏水 1000ml(十四)1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1%刚果红染液刚果红 1g蒸馏水 100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05mol/L醋酸缓冲液(pH5) lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml,取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠 2g醋酸铅 2g5%氯化镁 5ml以上作用液在临用时配制,最终在pH5~5.2,过滤使用。
(王世藩汇编)三、细胞培养和细胞融合溶液(一)0.01mol/LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氢二钠液(甲液):NaH2PO4·12H2O 35.814g双蒸水加至500ml0.2mol/L磷酸二氢钠液(乙液):NaH2PO4·12H2O 15.601g双蒸水加至500ml取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加双蒸水至1000ml。
混匀待完全溶解分装,经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
(二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)称取0.5克PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化,加入等量37℃予热的MEM培养液,混匀,保温在37℃水浴中待用。
(三)MEM培养液(含10%小牛血清)MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4g双蒸水 1000mlNaHCO3 1.5g谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g56℃灭活30分钟的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后,用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2~0.3),然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺,待完全溶解后,立即用G6抽滤除菌,分装,置4℃冰箱保存备用。
(四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25gEDTA粉 20.0mg0.01mol/L PBS 100ml先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合,置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解,液体呈透明为止),用G5抽滤,分装置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液1.原液甲NaCl 160gKCl 8gMgSO4·7H2O 2gMgCI2·6H2O 2g溶于800ml馏水中。
CaCl2(无水) 2.8g溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后,加水至1000ml用滤纸滤过,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
原液乙Na2HPO4·12H2O 3.04gKH2PO4 1.2g葡萄糖 20.0g溶于800ml蒸馏水中,用滤纸过滤,然后加0.5%酚红80ml,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
2.使用液甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口,经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。
使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。
(六)1640培养液(含lO%小牛血清)RPMI-1640粉 10.39g双蒸水加至1000ml通入适量的C02气体,边通入CO2边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。
用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml 10ml灭活小牛血清 110ml混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。
(七)青、链霉素溶液青霉素钠盐(40万u/瓶) 5瓶链霉素(100万u/瓶) 2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。
双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。
4%。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)用无菌青霉素瓶,在室温下称取1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml,溶解,混匀,用黑纸包严,避光置冰箱冰格中保存。
最好用时现配。
(十)2×SSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。