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常用抗生素对益生菌存活率影响的研究_李忠玲

饲料添加剂是配合饲料的核心,其在配合饲料中的地位是不能被其他营养物质所替代的。

益生素作为饲料添加剂能改善畜禽生产性能,这在许多试验中已得到证实,其中产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌是益生素中常用的菌种。

大量试验证明,将益生素分别与抗生素、寡糖、酸化剂、中草药、肽等合理配伍表现出了理想的使用效果[1]。

抗生素与益生素配伍使用,其意义有2点:一是通过添加益生素减少或避免抗生素的某些副作用;二是抗生素作为一种较成熟的饲料添加剂目前在各类饲料中已普遍应用,并能显著地提高动物的生产性能,因而在短期内用益生素完全代替抗生素其难度还很大[2]。

抗生素对益生素可能有三方面的影响:掩盖益生素的使用效果;破坏有益微生物的活力;杀灭肠道有害菌而对有益菌无影响。

因此,抗生素与益生素究竟怎样以更佳的方式投入生产,既能充分发挥畜禽的生产性能,又能满足绿色畜产品生产的要求,同时降低环境污染,是一个值得深入探讨的方向[3]。

本文仅对抗生素配伍使用作一初步研究,希望对其在养殖业中的应用有所帮助。

1材料和方法1.1菌种a.产朊假丝酵母;b.枯草芽孢杆菌;c.嗜酸乳杆菌。

以上菌种由陕西省科学院酶工程研究所保存。

1.2培养基a.马铃薯培养基(PDA):马铃薯20g,葡萄糖2.0g,琼脂2.0g,蒸馏水100mL,pH值自然;b.蛋白胨5g,葡萄糖10g,磷酸二氢钾1g,琼脂粉18.4g,硫酸镁0.5g,孟加拉红0.033g,氯霉素0.1g,蒸馏水1000mL;c.TSA:胰蛋白胨15g,大豆蛋白胨5g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,pH7.1~7.5;d.改良MC:大豆蛋白胨5g,牛肉膏5g,酵母膏5g,葡萄糖20g,乳糖20g,碳酸钙10g,琼脂20g,1%中性红5mL(调pH值后再加),蒸馏水1000mL,pH6.0;e.MRS:酪蛋白胨,10g,牛肉膏10g,酵母膏5g,葡萄糖5g,乙酸钠5g,柠檬酸二胺2g,吐温80,1mL,磷酸氢二钾2g,硫酸镁0.2g,硫酸锰0.05g,蒸馏水1000mL,pH6.8。

1.3抗生素a.硫酸粘杆菌素B;b.杆菌肽;c.土霉素;d.莫能霉素钠;e.盐酸林可霉素;f.新霉素硫酸盐;g.磺胺嘧啶;h.酒石酸泰乐菌素。

1.4仪器和设备高温灭菌锅、超净工作台、恒温振荡器、恒温培养箱。

1.5方法将相应抗生素按不同浓度过滤除菌后混入降温至50℃的各相应培养基,同时以不加抗生素的培养基做空白对照。

由成熟斜面粘取少许菌泥,产朊假丝酵母、枯草芽常用抗生素对益生菌存活率影响的研究李忠玲1,李本光1,岳淑宁2,张红艳1,秦涛2(1.陕西省科学院酶工程研究所,陕西西安710600;2.陕西省酶工程技术中心,陕西西安710600)摘要:研究了9种抗生素对产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率的影响。

结果表明,对3种益生菌存活率影响都较小的抗生素有3种,占所研究抗生素总量的1/3。

对产朊假丝酵母有影响的抗生素有1种,占所研究抗生素总量的1/9;对枯草芽孢杆菌有影响的抗生素有6种,占所研究抗生素总量的2/3;对嗜酸乳杆菌有影响的抗生素有6种,占所研究抗生素总量的2/3。

以上可以看出,枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌受到抗生素影响的几率较大,产朊假丝酵母受抗生素影响的几率较小。

关键词:抗生素;产朊假丝酵母;枯草芽孢杆菌;嗜酸乳杆菌中图分类号:S816.7文献标识码:A文章编号:0254-5071(2012)01-0061-04Effect of antibiotic on survival rates of probioticsLI Zhongling1,LI Benguang1,YUE Shuning2,ZHANG Hongyan1,QIN Tao2(1.Institute of Enzyme Engineering,Shaanxi Academy of Sciences,Xi’an710600,China;2.Shaanxi Center of Enzyme Engineering and Technology,Xi’an710600,China)Abstract:The effects of9antibiotics on survival rates of Candida utilis,Bacillus subtilis and Lactobacillus acidophilus were studied.There were3an-tibiotics,1/3of total antibiotics tested in this study,having slight influencing on survival rates of all3probiotics.There was1antibiotic,1/9of total antibiotics tested in this study,influencing the survival rate of C.utilis.There were6antibiotics,2/3of total antibiotics tested in this study,influenc-ing the survival rate of B.subtilis.There were6antibiotics,2/3of total antibiotics tested in this study,influencing the survival rate of L.acidophilus. The results showed that B.subtilis and L.acidophilus were more sensitive on antibiotics than C.utilis.Key words:antibiotic;Candida utilis;Bacillus subtilis;Lactobacillus acidophilus收稿日期:2011-08-15基金项目:陕西省科学技术研究发展计划项目(2010K02-13)作者简介:李忠玲(1973-),女,黑龙江齐齐哈尔人,助理研究员,主要从事微生物育种、酶工程技术方面的研究工作。

孢杆菌、嗜酸乳杆菌分别用生理盐水稀释适当倍数,取1mL 加入灭菌后的培养皿,倒入各相应培养基混匀,培养计数。

产朊假丝酵母用孟加拉红培养基,28℃培养;枯草芽孢杆菌用TSA培养基,30℃培养;嗜酸乳杆菌用改良MC培养基,30℃培养。

菌体存活率=加抗生素培养皿中菌落数÷空白培养皿中菌落数×100%。

2结果与讨论2.1硫酸粘杆菌素B对益生菌的影响硫酸粘杆菌素B规定使用剂量0.05g/L~0.10g/L。

2.1.1对产朊假丝酵母的影响该药品在规定使用剂量下不影响该菌存活率,在使用剂量加倍的情况下该菌存活率为97%(见图1),说明该菌对该药品规定使用浓度不敏感,可以共同使用。

2.1.2对枯草芽孢杆菌的影响该药品在使用剂量时该菌存活率为0,在使用剂量减小至0.01g/L时该菌的存活率仅达到42%(见图1),说明该益生菌对该药品规定使用剂量敏感,不能与该抗生素共同使用。

2.1.3对嗜酸乳杆菌的影响该药品在使用剂量时对该菌体存活率影响不大,但抑制该菌生长,对照菌落24h可数,加有抗生素的随剂量的加大可数时间延长,较低剂量在72h可数,较高剂量在96h 可数。

该抗生素的存在导致菌落形态有所改变,由较圆的形状变为很小的星形。

在规定的使用剂量下菌体存活率为96%,当使用浓度增加至0.20g/L时存活率降低为60%,总体趋势是随着剂量的加大存活率降低(见图1)。

但该药品在规定使用剂量下对该菌抑制生长。

考虑到动物体内的代谢时间较短,认为该药品不宜与该益生菌共同使用。

2.2杆菌肽对益生素的影响杆菌肽规定使用剂量0.004g/L~0.04g/L。

2.2.1对产朊假丝酵母的影响该药品在规定使用剂量时不抑制该菌生长,不影响该菌活菌率,在使用剂量加倍的情况下该菌体存活率为96%(见图2),说明该菌对该抗生素规定使用浓度不敏感,可以共同使用。

2.2.2对枯草芽孢杆菌的影响该药品在规定使用剂量时不抑制该菌的生长,但影响该菌的存活率。

在添加量为0.04g/L条件下存活率仅为25%,在添加量为0.02g/L条件下存活率为64%,说明该菌对该抗生素耐性较低,不宜共同使用。

同时可以看出,随着添加量的加大,该菌存活率呈降低趋势,当添加量达到0.08g/L时菌体存活率为0(见图2)。

2.2.3对嗜酸乳杆菌的影响该药品在规定使用剂量时不抑制该菌生长,但影响该菌存活率,在添加量为0.02g/L时活菌率仅为18%,说明该菌对该抗生素规定使用剂量敏感,不宜共同使用。

同时可以看出,随着添加量的加大,该菌存活率呈降低趋势,当添加量达到0.03g/L时菌体存活率为0(见图2)。

2.3土霉素对益生菌的影响土霉素规定使用剂量0.01g/L~0.05g/L。

对产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌的影响:该药品在规定使用剂量下不抑制这3种菌生长。

在添加量增加至0.10g/L的情况下3种菌存活率分别为98%、98%、98%(见图3),说明这3种菌对该药品规定使用浓度不敏感,可以共同使用。

2.4莫能霉素钠对益生菌的影响图1硫酸粘杆菌素B对益生素的影响Figure1.Effects of colistin B on probiotics图2杆菌肽对益生素的影响Figure2.Effects of bacitracin onprobiotics图3土霉素对益生素的影响Figure3.Effects of oxytetracycline onprobiotics莫能霉素钠规定使用剂量0.11g/L~0.09g/L 。

2.4.1对产朊假丝酵母的影响该药品在规定使用剂量时该菌不能生长。

在添加量降低至0.007g/L 的情况下该菌存活率为72%,当添加量为0.014g/L 时该菌存活率降低为0(见图4)。

而且该药品导致该菌菌落形态有所改变,由原来的圆形变为近似三角形。

所以该抗生素对该益生菌的作用影响较大,不宜与该益生菌共同使用。

2.4.2对枯草芽孢杆菌的影响该药品在规定使用剂量时该菌不能生长,在添加量降低至0.014g/L 的情况下该菌存活率为20%(见图4)。

所以该抗生素对该益生菌的作用影响较大,不宜共同使用。

2.4.3对嗜酸乳杆菌的影响该药品在规定使用剂量时该菌不能生长,在添加量降低至0.014g/L 的情况下该菌存活率为21%(见图4)。

说明该菌对该药品规定使用剂量敏感,不能共同使用。

2.5盐酸林可霉素对益生菌的影响盐酸林可霉素规定使用剂量0.0077g/L~0.077g/L 。

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