• 4）过氧化氢酶试验 取上述平板上生长的 菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试 液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢 酶试验阳性，否则为阴性。
• 结果判断：若哥伦比亚琼脂培养基平板上 有厌氧杆菌生长（有或无芽孢），且过氧 化氢酶反应阴性的，应进一步进行适宜的 鉴定试验，确证是否为梭菌；如果哥伦比 亚琼脂培养基平板上没有厌氧杆菌生长， 或虽有相符或疑似的菌落生长但鉴定结果 为阴性，或过氧化氢酶反应阳性，判供试 品未检出梭菌。
• 4、2015版药典 • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30〜 35℃培养18〜24小时。 • 2）RV沙门增菌液体培养基中，30〜35℃培 养18〜24小时。 • 3）取少量R V沙门菌增菌液体培养物划线 接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 平板上，30〜35℃ ：培养18〜48小时。
• 4）用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培 养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种， 培养18〜24小时。或采用其他适宜方法进 一步鉴定。
• 结果判断：若溴化十六烷基三甲铵琼脂培 养基平板上有菌落生长，且氧化酶试验阳 性，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证 是否为铜绿假单胞菌。如果平板上没有菌 落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴 性，或氧化酶试验阴性，判供试品未检出 铜绿假单胞菌。
第三章 葡萄球菌属
• 金黄色葡萄球菌： • 革兰氏阳性球菌的代表，细胞壁含90%的肽 聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构 比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着 后不被酒精脱色故而呈现紫色。 • 金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的 渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄 球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了， 于是发现了青霉素。
• 2、致病性 • 可以侵犯粘膜、皮肤以及其他器官。主要 在机体抵抗力减弱的时候入侵，比如长期 大量应用激素，或者免疫缺陷疾病（艾 滋）。 • 3、鉴别检查（2015版药典） • 1）取相当于lg 或lml供试品的供试液，接 种至适宜体积(经方法适用性试验确定）的 沙氏葡萄糖液体培养基中，混匀，30〜 35℃培养3〜5天。
• 二 黑曲霉 • 是曲霉属真菌中的一个常见种。广泛分布 于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。 可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、 果胶酶。 • 1、生物学特性 • 多细胞。
• • • • •
2、致病性 不是常见的致病菌。 3、培养 1）菌液制备 取黑曲霉的新鲜培养物加人3〜5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋 白胨缓冲液或0.9%无菌氣化钠溶液，将孢 子洗脱。
• 一 白色念珠菌 • 属于假丝酵母菌属，也称为白假丝酵母， 是单细胞真菌类，但是细胞在增殖的过程 中连在一起，形成念珠状，故称为念珠菌。 • 1、生物学特性 • 菌体圆形或卵圆形，2×4μm，以出芽方式 进行繁殖，孢子伸长成芽管，不与母体脱 离，形成较长的假菌丝。 • 革兰氏染色阳性，但着色不均匀。
• 2）取上述预培养物划线接种于沙氏葡萄糖 琼脂培养基平板上，30〜35℃培养24〜4 8 小时。 • 3）挑取疑似菌落接种至念珠菌显色培养基 平板上，培养24〜48小时(必要时延长至7 2小时），或采用其他适宜方法进一步鉴定。 • 白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基上生 长的菌落呈乳白色，偶见淡黄色，表面光 滑有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增 大，颜色变深、质地变硬或有皱褶。
二、沙门菌 • 沙门菌属是一类寄生在人类和动物肠道中， 生化反应和抗原结构相关的革兰氏阴性杆 菌。分为肠道沙门菌和邦戈沙门菌两个种。
• 1、生物学特性 • 大小0.6-1.0×2-4μm，多数周身鞭毛，一 般无荚膜，均无芽孢。 • 不发酵乳糖或蔗糖，对葡萄糖、麦芽糖和 甘露糖发酵，伤寒沙门菌不产气。 • 2、致病性：内毒素引起宿主体温升高，白 细胞数下降等；肠毒素引起的腹泻。
• 4、2015版药典 • 1)取相当于lg 或lml供试品的供试液2份， 其中1份置8℃保温10分钟后迅速冷却。 • 2）将上述2份供试液分别接种至适宜体积 (经方法适用性试验确定）的梭菌增菌培养 基中，置厌氧条件下30〜35℃培养48小时。 • 3）取上述每一培养物少量，分别涂抹接种 于哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条 • 件下30〜35℃培养48〜72小时。
第二章 假单胞菌属
• 铜绿假单胞菌 • 俗称绿脓杆菌，由于在生长过程中产生绿 色水溶性色素，感染后使脓汁或敷料出现 绿色而得名。 • 1、生物学特性 • 大小为0.5-1.0×1.5-3.0μm，直或微弯的 杆菌，无芽胞，有荚膜，需氧，革兰氏染 色阴性。
• 2、致病性：经常引起手术切口、烧伤组织 感染，表现为局部化脓性炎症。 • 3、鉴别检查 • 氧化酶试验：将洁净滤纸片置于平皿内， 用无菌玻棒取上述平板上生长的菌落涂于 滤纸片上，滴加新配制的1%二盐酸N ,N-二 甲基对苯二胺试液，在30秒内若培养物呈 粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳 性，否则为阴性。
• 2）取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼 脂培养基平板上，30〜35℃培养18〜72小时。 • 结果判断：甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上有 黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落生长，应 进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否 为金黄色葡萄球菌；若平板上没有与上述形态 特征相符或疑似的菌落生长，或虽有相符或疑 似的菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未 检出金黄色葡萄球菌。
• 甲基红试验：细菌（如大肠埃希菌）发酵 葡萄糖产酸，使培养基PH下降至4.2或更低， 则为甲基红阳性。 • VP试验：由Voges和Proskauer两位学者创 建，故有此学名。 • 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分 解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧 成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被 空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+） 反应。 大肠埃希菌v-p试验阴性。
• 4、2015版药典 • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，混匀。30〜 35℃：培养18〜24小时。 • 2）上述培养物划线接种于溴化十六烷基三 甲铵琼脂培养基平板上，30〜35℃培养18 〜72小时。 • 3）取上述平板上生长的菌落进行氧化酶试 验，或采用其他适宜方法进一步鉴定。 • PS：2010版药典要进行绿脓菌素试验。
实验室常见微生物
李继辉
第一章 肠杆菌科
• 一、大肠埃希菌 • 俗称大肠杆菌，属于埃希菌属。在婴儿出 生后数小时即进入肠道，并终身伴随。当 宿主免疫力下降或菌侵入肠外组织或器官 （如尿道）时，可引起肠外感染。某些特 殊菌种能导致腹泻。 • 常作为粪便污染的检测指标。 • 革兰氏染色阴性。
• 1、生物学特性 • 大小：0.4-0.7×1-3μm。周身鞭毛。兼性 厌氧。
• 3、鉴别检查 • 三糖铁（TSI）琼脂试验： • 可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产 气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 • 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因 量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化， 加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱 性产物，故使斜面后来又变红，底部由于 是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。
第五章 真菌
• 真菌（fungus）是一种真核细胞型微生物。 有典型的细胞核和完善的细胞器。不含叶 绿素、无根、茎、叶的分化。 • 真菌可分为单细胞和多细胞两类。 • 单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称酵母菌 （yeast）。 • 多细胞真菌大多长出菌丝和孢子，交织成 团，称丝状菌，又称霉菌（mold）。
• 结果判断：若沙氏葡萄糖琼脂培养基平板 上有疑似菌落生长，且疑似菌在念珠菌显 色培养基平板上生长的菌落呈阳性反应， • 应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否 为白色念珠菌；若沙氏葡萄糖琼脂培养基 平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但 • 鉴定结果为阴性，或疑似菌在念珠菌显色 培养基平板上生长的菌落呈阴性反应，判 供试品未检出白色念珠菌。
第六章 枯草芽孢杆菌
• 枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。单 个细胞0.7-0.8×2-3微米，着色均匀。无 荚膜，周身鞭毛，能运动。 • 革兰氏阳性菌，芽孢0.6-0.9×1.0-1.5微 米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏， 芽孢形成后菌体不膨大。（与梭菌区别） • 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色， 在液体培养基中生长时，常形成皱醭。 • 需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉， 分解色氨酸形成吲哚。
• 2、鉴别检查 • 能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气。 • 吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐（IMVIC）试 验结果为“++--”。 • MUG(4-甲基伞形酮葡糖苷酸）：4-甲基伞 形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。 • 吲哚（靛基质）试验：指有些细菌如大肠 埃希菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲 哚(靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基 苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则 为吲哚试验阳性。
• 结果判断：若木糖赖氨酸脱氧胆酸的斜面为红色、底层为黄色， • 或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行 适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平 板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结 • 果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红 色、底层未见黄色（或斜面黄色、底层未见黄 色或黑色，判供试品未检出沙门菌。
• 枸橼酸盐利用试验：是以枸橼酸钠为唯一 碳源、PH值7.0的培养基上，产气杆菌分解 枸橼酸钠产生碳酸盐，使培养基由中性变 为碱性，培养基中指示剂溴麝香草酚蓝 (BTB)由浅绿色变为深蓝色，此为枸橼酸盐 利用试验阳性。大肠杆菌因不能利用枸橼 酸盐，此试验为阴性反应。
• 3、2015版药典： • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35 ℃培养 18〜24小时； • 2）麦康凯液体培养基中，42〜44 ℃培养24〜 48小时； • 3）物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上， 30〜35 ℃培养18〜72小时。 • 结果判断：若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落 生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验， 确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基 平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定 结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。