万方数据
ＤＮＡ的合成，抑制细胞由Ｇ，期进入Ｓ期［３ｊ，这种 抑癌机理称为ｐ１６ＩＮＫ４，＿－ｐＲＢ途径。ｐ１６蛋白除抑制 ＣＤＫ４活性外，同样对ＣＤＫ６也有抑制作用。ｐ１６ 蛋白是目前为止发现的第１个直接控制细胞增殖周 期的细胞固有蛋白Ｅ４］，ｐ１６的抑制作用缺失，将使细 胞异常增生［５］。 肿瘤细胞的细胞增殖失控，很大程度上是因为 细胞周期调控机制存在缺陷，推动因素Ｃｙｃｌｉｎ—ＣＤＫ 作用过度，而阻遏因素作用不足或缺失。由于细胞 进程加速，没有足够的细胞停顿来维护基因组的完 整性，肿瘤细胞基因组的缺陷越来越多，最终形成肉 眼可见的肿瘤，并发生侵袭和转移。此外，细胞周期 调控蛋白也是很多肿瘤治疗选择的作用靶点，可引 起肿瘤细胞分裂的停顿，导致细胞凋亡的发生，抑制 肿瘤的生长。
肺癌的发生是多因素多步骤渐进演变过程。近 年研究表明细胞周期与细胞癌变密切相关，许多癌 基因，抑癌基因参与了细胞周期的调控，或者本身就 是细胞周期的组成部分，它们的改变导致了细胞周 期的失控，表现为细胞的失控性生长。目前在细胞 周期调控上存在２条重要通路：ｐ１４Ａ盯－ｐ５３通路和 ｐ１６ｌｎＫ４，＿ＲＢ通路，它们在Ｇ。一Ｓ和Ｇ２一Ｍ限制点 中起到关键作用。 近年来，随着对肺癌分子遗传学机制认识的深
ｐ１６基因的功能 ｐ１６基因通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶
隆了ｐ１６基因的ｅＤＮＡ。１９９４年Ｋａｍｂ等应用克 隆技术对４６个人类恶性细胞系进行ｐ１６基因研
ＣＤＫ４活性而发挥调控作用［２］。ｐ１６基因发生突 变，它的编码蛋白表达水平将会下降或消失，失去原
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４３６Ｘ．２０１１．０１８．０１３
３．２
ｐ１６基因突变检测方法
检测方法采用质量
光谱法、差异甲基化杂交。ｐ１６纯合子缺失或突变 的检测包括实时ＰＣＲ的单链构型多态性分析
●簟
矽Ｌ
图ｌ ｐ１６基因抑癌机理示意图
３
万方数据
（ＳＳＣＰ）Ｅ１０］，基于基因微 电泳加上ＰＣＲ及ＰＣＲ一 应用控制模板ＤＮＡ银 突变。
３．３
ｐ１６基因的典型变化ｐ１６基因的异常包括
有的生物学功能，参与肿瘤的发生。ｐ１６ⅢＫ４８蛋白是 细胞周期增殖过程中负调节因子，通过与ＣｙｃｌｉｎＤ 竞争性结合ＣＤＫ４／６，抑制ＣＤＫ４／ＣｙｃｌｉｎＤｌ和 ＣＤＫ６／ＣｙｃｌｉｎＤｌ的活性，使ｐＲＢ处于非磷酸化或 低磷酸化状态而能与转录因子Ｅ２Ｆ结合，从而抑制
基金项目：江苏省。六大人才高峰”资助课题（０６一Ｂ－１８）；南通市 科委社会发展计划项目＜￥２００６０４８） 作者单位：２２６００１南通大学第二附属医院呼吸科 通信作者：陈建荣。Ｅｍａｉｌ：ｄｒｃｈｅｎｊｒ＠１６３．ｅｏｍ
万方数据
・
１４１３・
鳞状化生的支气管组织中，有较为频繁的ｐ１６基因 改变，其具体机制有待于进一步研究。 ４．２肺癌的诊断ｐ１６基因等位基因异常甲基化 是肺癌发生的早期事件，可作为肺癌早期诊断的分 子标志物和用于肺癌预防的监测【９］。包括肺癌在内 的许多肿瘤，抑癌基因ｐ１６功能的失活是由于启动 子区的超甲基化，并且在ＮＳＣＬＣ的进程中发挥了 重要的作用。ＤＮＡ的异常甲基化在人类肿瘤中是 常见现象［１引。表观遗传学上研究最深入的是ＤＮＡ 甲基化机制，它是指一种酶介导的化学修饰过程。 ＤＮＡ甲基化是指在ＤＮＡ甲基化转移酶的作用下， 基因组ＣｐＧ二核苷酸的胞嘧啶５ ７碳原子共价键结 合一个甲基基团。ＤＮＡ甲基化后核苷酸顺序未变， 而基因表达受影响。Ｐａｌｍｉｓａｎｏ等［１７］应用ＭＳＰ方 法检测肺鳞癌患者痰液中ｐ１６的甲基化，检出率为 １００％，重要意义在于早于临床诊断３年。ｐ１６基因 失活在ＮＳＣＬＣ的形成中也起着重要作用，是较早 期事件之一［１ ８１。肺癌５年生存率较低，通过早期诊 断和治疗有可能提高肺癌的生存率。 ４．３肺癌的分型临床上肺癌分为２种亚型：小细 胞肺癌和ＮＳＣＬＣ。小细胞肺癌占总数的ｌＯ％～ １５％，ＮＳＣＬＣ占８５％～９０％。ＮＳＣＩ。Ｃ按照组织学 类型又分为腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌、混合性、神 经内分泌癌。有学者研究１７１例ＮＳＣＬＣ患者，发 现６２例（３６．３％）有ｐ１６蛋白的缺失，ｐ１６蛋白的异 常表达与鳞状细胞癌密切相关．在腺癌中ｐ１６蛋白 异常者较为少见，并且与腺癌的预后无关［１ ９１。Ｙｅ 等Ｅｚ０３应用多重ＰＣＲ的方法对１２５个肺癌组织进行 了检测，ｐ１６的总突变率为１５．２％，ｐ１６的突变率在 ＮＳＣＬＣ（１９．３％）比小细胞肺癌（５．４ ０．４）更频繁。 ４．４预后判断ｐ１６基因第２外显子突变可作为 ＮＳＣＬＣ恶性进展的标志之一，也可作为一种判断预 后的指标。研究发现在鳞状细胞癌中，ｐ１６蛋白的 丢失往往提示预后不良Ｅ１９］。在肺癌中ｐ１６基因的 失活率约占２５％～７０％Ｅ ４｜，这说明ｐ１６基因的改变 与肿瘤密切相关。
ｃａｕｓｅ
ｐ１６ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｐ１６ ｃｏｕｌｄ ｇｒｏｗｔｈ．ｐ１６ ｇｅｎｅ
ｃａｎ
ｃｅｌｌｓ
ｏｕｔ
பைடு நூலகம்
ｏｆ
ｂｅｃｏｍｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ
ｔｒｍｏｒ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
通量悬浮微阵列来检测ｐ５３、ｐ１６、Ｒｂ和表皮生长因 子受体（ＥＧＦＲ）的基因突变，提取６５例肺癌组织和 ２０例癌旁肺组织的基因组ＤＮＡ，结果显示ｐ５３、 ｐ１６、Ｒｂ和ＥＧＦＲ在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的单 基因突变率分别是５３．８％（３５／６５）、２０．０％ （１３／６５）、７．７％（５／６５）和５．４％（２３／６５），癌旁肺组 织分别是５．０％（１／２０）、５．０％（１／２０）、０．０％和
１例检出５６位密码子Ｔ—Ａ突变，亮氨酸变为谷氨 酰胺；１例７９和８１位密码子分别发现１个Ｃ—Ａ的 同义突变；ｌ例８０和７９位密码子检出点突变，分别 为８０位密码子Ｇ—Ａ突变，谷氨酸变为赖氨酸，７９ 位密码子Ｃ—Ａ突变。ｐ１６基因在ＮＳＣＬＣ中的主 要突变形式是点突变，主要集中在ｐ１６基因的１２１、 ６９和７０位密码子，导致原编码氨基酸的改变。 应用ＰＣＲ—ＳＳＣＰ银染技术对标本的ｐ１６基因 突变进行检测，ＳＳＣＰ不仅能分析是否存在突变，而 且能将突变定位于特定的片段，如需了解突变位点 及序列改变情况，只需将ＳＳＣＰ筛出的阳性标本进 行序列分析即可。为提高ＰＣＲ—ＳＳＣＰ的敏感度及 控制假阳性，在设计引物时把扩增片段控制在
０．０
ｏＡ。联合检测４种基因敏感性、特异性、准确率
分别是８１．５％（５３／６５）、９０．Ｏ％（１８／２０）和８３．５％ （７１／８５），Ｉ、ＩＩ和Ⅲ期的突变率分别是７８．３％ （１８／２３）、８０．０％（１６／２０）和８６．４％（１９／２２）。更高 的特异性和灵敏度高通量悬浮芯片的建立，可以用 于同时检测ｐ５３、ｐ１６、Ｒｂ和ＥＧＦＲ在ＮＳＣＩ。Ｃ的基 因突变。悬架微阵列有助于提高ＮＳＣＬＣ分子诊断 的敏感性和引导ＮＳＣＬＣ的分子靶向治疗。应用 ＰＣＲ与双链ＤＮＡ直接测序技术对４０例ＮＳＣＬＣ 患者的ｐ１６基因外显子２的纯合缺失与序列改变进 行研究，发现２例存在ｐ１６基因外显子２的纯合子 缺失。发生ｐ１６基因突变的１４例患者共检出２０个 点突变，突变大部分涉及到了编码氨基酸的变化，其 中８例为１２１位密码子中３８０位碱基改变，２例为 Ａ—Ｔ突变，酪氨酸变为苯丙氨酸，１例为Ａ—Ｇ突 变，酪氨酸变为半胱氨酸，５例为Ａ—Ｃ突变，酪氨
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮ
Ｊｉａｎ—ｒｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｄｒｃｈｅｎｊ国１６３．ｃｏｒｎ
ｉｓ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ
ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｎｅｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｕｍｏｒ－ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ
２
入，寻找和利用有效的分子生物学标记对肺癌进行
分子诊断具有良好的前景。ｐ１６基因是一种抑癌基 因，ｐ１６基因变异是肺癌等多种恶性肿瘤发生、发展 过程中的一个重要事件。ｐ１６基因突变的检测有助 于肺癌的诊断、发生机制研究及预后判断。
１
ｐ１６基因的结构 １９９３年Ｓｅｒｒａｎｏ等首次发现了ｐ１６基因，并克
．综述．
肺癌患者ｐ１ ６基因检测的研究进展
蔡淑娟 陈建荣
【摘要】细胞周期与细胞癌变密切相关，抑癌基因ｐ１６参与细胞周期调控。ｐ１６的改变可导致细胞
的失控性生长，所以ｐ１６基因可成为肿瘤选择作用的治疗靶点。ｐ１６基因检测对肺癌的发病机制研究、
早期诊断、预后评估和分子靶向治疗有一定帮助。 【关键词】ｐ１６基因；肺癌；基因突变；细胞周期
理论上将细胞周期分为４个时期：Ｇ。／Ｇ。期、Ｓ 期、Ｇ：期、Ｍ期。细胞周期调控的关键就在于，准 确评价细胞状态，控制２个细胞周期转位点（Ｇ。／ Ｇ。一Ｓ转位点，Ｇｚ－Ｍ转位点）∽］，使细胞有足够的时 间来维护基因组的完整性。见图１。
３
ｐ１６基因的检测 ｐ１６基因突变的标本来源于肺癌
３．１标本来源
组织标本、血液、良恶性胸水、纤维支气管镜吸出物、 肺泡灌洗液和呼出气冷凝液［７］。肿瘤组织的检出率 高于血浆。检测ｐ１６纯合子缺失的标本来源于肺癌 组织标本∞］、经纤维支气管镜刷检的脱落细胞、血 清∽Ｊ和胸水。
ｐ１６ ｇｅｎｅ
ｉｓ
ｈｅｌｐｆｕｌ ｆｏｒ ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ，ｅａｒｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ—ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｐ１ ６
ｇｅｎｅ；Ｌｕｎｇ
ｃａｎｃｅｒ；Ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ
４
ｂｐ以内，据文献报道ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对
ｐ１６基因检测的临床意义 Ｗａｎｇ等［１妇通过构建高
１７６～３４５ ｂｐ片段的突变敏感度最高，并且每个肿