积分实验室练习6：数据定量分析在这个实验中,您将建立具有三个浓度级别的校正数据库,并将其保存为方法的一部分。

该方法用于未知物的定量计算。

在这个实验中：•获取所需信息以设置校正方法•建立一个5 个浓度级别的含内标的校正数据库•定量一个未知化合物对以下化合物进行定量：积分积分积分精确定量的重要因素之一是正确积分。

1)通过选择File/LoadDataF ile…调用C:\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\ CLWV020.D 文件，选择Method / Load Method…调用DEFAULT.M 方法。

2)选择Chromatogram / Select Integrator及RTE Integrator单击OK。

OK 对积分来说只是临时选择。

现在让我们对 caffein设定积分参数。

3)选择Chromatogram / Extract Ion Chromatograms…完成图1 所示的需要输入的项目（注意时间范围）单击OK。

NOTICE图 14)现在编辑RTE的缺省积分参数。

选择Chromatogram / MS SignalIntegration Parameters…完成图 2 所示的要输入的项目。

须知当欲在最小峰面积 (minimum peak area) 中添入大于100 的数之前必须选中Area Counts 选项框。

积分NOTICE图 25)单击OK接受所做的改变。

现在通过选择Chromatogram /Integrate 用这些参数做积分。

注意离子 194被积分，而离子67没有被积分。

让我们降低最小面积来解决这一问题。

6)选择Chromatogram / MS Signal Integration Parameters…完成图 3中所示的各项内容。

NOTICE图 37)单击Save…和OK输入积分文件名字VOLATILE.P，单击OK。

积分图 48)在积分参数框中单击OK 返回离子质量色谱。

在Chromatogram /Integrate 用降低后的最小峰面积参数做积分。

注意此时离子67 和194都被积分了。

现在我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。

9)选择Chromatogram / Draw Chromatogram查看当前数据文件的TIC 图。

建立校正曲线：建立校正曲线：无论SCAN 和SIM 方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。

用提取离子定量比用TIC 精度更高。

TIC 则用于开始设置校正参数时确定保留时间。

1)选择Calibrate / Set Up Quantitation...。

2)Quantitation Database Globals对话框会显示出来。

完成图 5 中所需填入的内容。

NOTICE图 5注意标有NOTICE 处用了 RTE 积分参数文件。

3)完成后单击OK。

Edit Compounds框（图 6）会显示出来：建立校正曲线：图 64)单击Insert Above，图 7会显示出来：图 7注意:必须首先输入内标。

所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。

5)将7-13 分钟范围内的色谱图放大在窗口中。

对准窗口2 中10.7分钟处双击鼠标右键。

在屏幕上会出现什么信息？_______________________________________________________________注意保留时间(箭头在X 轴的位置)被填写在QuantSetup窗口。

同时所指定保留时间的质谱显示在窗口1。

建立校正曲线：6)输入化合物名称。

填入化合物名称。

第二个化合物是Tributylphosphate大约在10.7分钟。

注意如果使用氘代内标时区分定量，化合物是靠信号而不是保留时间，因为内标和要定量的化合物共流出，因此峰会重叠。

ISTD选项被选中。

7)将箭头移到窗口将箭头放在M / Z93 上同时击鼠标左右键。

会发生什么？_______________________________________________________________8)用同样方法输入一个或几个特征离子。

对于Tributyl phosphate，特征离子是 135 。

9)全部输入之后，在Quant Setup 窗口底部击Save键。

这就完成了需要在定量数据库中添加单个化合物的任务。

10)重复以上步骤，把表1 中每个化合物输入定量数据库。

（注意Tributyl phosphate已经输入了。

）表 111)最后一个化合物输入并保存之后, 在定量设置栏目击Exit。

EditCompounds 画面（图 9）再次显现。

注意此时化合物的列出顺序。

定量化合物永远在内标之后（不管保留时间！）有4个化合物列于表中。

如有遗漏，点击遗漏的化合物，然后单击InsertAbove...。

当定量设置栏再次出现时输入化合物名字，保留时间，目标 / 特征离子。

然后单击 Save 并单击 Exit。

一旦4个化合物全部输入，单击Exit退出编辑化合物对话框（图 9）。

12)系统提示目前的文件尚未定量。

单击Yes对文件定量。

我们已经添加了化合物信息，现在要添加校正信息。

13)Update Calibration对话框（图 8）如下：建立校正曲线：图 814)在 Update Calibration 选项框中，为该校正级别输入一个标识。

缺省值是数字（如“1”）但也可以输字母（如“Low”）。

为该级别输入化合物浓度 (20) 注意已经填入了ISTD 浓度。

我们在哪里输入过这个量？_______________________________________________________________ 15)单击Do U p date键。

定量更新程序会提取指定离子并对其进行RTE 积分。

该信息存放在定量数据库中。

Edit Compounds 画面（图 9）显示出来。

图 916)单击View键查看三页定量信息。

在第3 页对错误的值进行编辑。

17)Next键用来查看第二个化合物的条目。

单击OK离开该画面，而单击Exit 退出Edit Compounds 面板回到数据分析。

现在我们拥有了含一个级别的校正数据库。

下一步是为校正数据库添加第二个浓度级别。

建立多－浓度级别校正数据库建立多－浓度级别校正数据库1)调用数据文件C:\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\CLWV050.D.。

2)选择Calibrate / Update… / Update One Level / OK系统将提示该数据文件未定量，单击Yes 进行定量。

3)下一步进入Update Calibration 对话框。

将浓度改为50，将校正级别改为2，单击Do Update…自动为数据库插入新浓度级别。

4)Exit 退出edit compounds 界面。

从这一标准校正曲线更换保留时间和离子比例，会改写原来用光标输入的和这一标准的微小差别。

5)选择Calibrate / Update… / Update One Level / OK填写图 10 所示各项内容，单击Do Update。

图 106)按照1) 至 5) 步骤输入下列浓度级别。

不必再次输入保留时间和离子比例。

数据文件和化合物浓度列于表 2 中：数据文件浓度浓度级别号CLWV100.D 100ppm 3CLWV150.D 150ppm 4CLWV200.D 200ppm 5内标浓度与前两个标样相同 (50 ppm)。

实验室练习6：数据定量分析建立多－浓度级别校正数据库7) 5 个浓度级别输入之后，单击View 以便检查浓度是否正确。

8)选择第一个化合物，单击Plot 看它的标准曲线，包括其校正因子和相关系数。

出现什么信息？_______________________________________________________________由于画内标化合物的曲线是无意义的，您不可能画出内标化合物的校正曲线，为什么内标化合物曲线是无意义的？_______________________________________________________________ 9)在Compound 窗口单击Next（如必要击 OK 保存更改）画面，化合物 #2 以校验该化合物的第二个浓度级别的数据。

在Plot 窗口单击Print 打印（这是获得方法文件的较好途径）。

10)打印之后击OK，改变线性拟合方式取得最佳平均响应因子 (Avg ofResponse Factors)，再做曲线。

反复用 Linear Regr，Force (0,0) 拟合包括原点在内的各点，加以比较。

重新设置拟合方式Avg ofResponse Factors。

对本次分析何种拟合方式更可靠，为什么？_______________________________________________________________ 11)查看过三页化合物信息之后，选OK然后Exit退出该窗口。

该校正数据库当前存储在计算机RAM 中，所以下一步是使其永久保存于硬盘中。

校正数据库作为方法的一部分保存。

12)选择Method / Save Method...。

13)为新方法命名为CLASSVOA.M。

建立了新方法，原来的方法 (DEFAULT.M) 未改变。

我们常用现有的方法作为模板建立新方法。

方法自动存储在缺省地址C:\MSDCHEM\n\METHODS 这里 n 是仪器编号。

使用自动定量设置建立多－浓度级别校正数据库使用自动定量设置AutoQuant Setup（自动定量设置）提供了一种给定量数据库创建化合物列表的半自动方法。

下列指南可引导您使用 AutoQuant Setup（自动定量设置）的全部步骤。

该指南使用化学工作站随附的演示文件。

在该指南中使用 default.m 和 evaldemo.d 之前，请先复制一份。

1.在 Data Analysis（数据分析）中，加载示范方法C:\MSDCHEM\1\METHODS\DEFAULT.M 和示范数据文件C:\MSDCHEM\1\DATA\EVALDEMO.D。

2.在Spectrum / Select Library（谱图/选择谱库）下选择DEMO.L。

3.选择 Calibrate / AutoQuant Setu（校准/自动定量设置）。

使用自动定量设置建立多－浓度级别校正数据库4.出现 Quantitation Database Globals（全局定量数据库）对话框时，进行如下更改：校准标题—键入 AutoQuant Tutorial使用 RTEINT—选中该对话框来使用 RTE积分器（不选则使用化学工作站积分器）。