无菌条件如何保证？
三、课题延伸
1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
总结植物组织培养过程:
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤
再分化
芽
织 或 细胞分 细 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
本课题内 容小结
基础 知识
实验具体操作过程
2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使
用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种 后立即盖好瓶盖。
实验具体操作过程
3、材料的切取和接种 插入时应注意方向，不要倒插，茎段、茎
尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。
➢进行外植体的接种
接种前用体积分数为70%的酒精将工 作台擦拭一遍，打开紫外灯照射20分钟。 工作台消毒后，首先点燃酒精灯。
PH、激素
PH、激素、 光照
植 物 体
影响植物组织培养的因素
1、外植体的选取 ➢不同植物的组织培养难度不同 ➢同一种植物的不同组织培养难度不同
影响植物组织培养的因素
2、培养基的配制(MS培养基)
影响植物组织培养的因素
2、培养基的配制(MS培养基)
➢大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S ➢微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co ➢有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 ➢植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
•
相信命运，让自己成长，慢慢的长大 。2020年11月15日星 期日1时 44分9秒Sunday, November 15, 2020
•
爱情，亲情，友情，让人无法割舍。20.11.152020年 11月15日星期 日1时44分9秒 20.11.15
谢谢大家！
4、环境不清洁
影响植物组织培养的因素
4、消毒：在培养的整个过程中，都需要是一 个无菌环境
5、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8、温度控制在18—22℃、每日 光照12h
实验具体操作过程
制备MS固 体培养基
外植体消毒
接种
栽培
移栽
培养
实验具体操作过程
（一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验 室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来 制备。
实验具体操作过程
1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物 一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
实验具体操作过程
2、配置培养基 ①定容 ②调PH ③培养基的分装
每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培 养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培 养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污 染。
实验具体操作过程
（四）培养 无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度， 光照
➢接种后的锥形瓶放在培 养箱或培养室中培养。
➢培养条件：18-22℃， 每日光照12小时。
菊花 组织 培养
实验 操作
植物体 的组织
培养
影响组 织培养 的因素
细胞分化
细胞全能性 组织培养过程
营养 激素 环境条件
MS固体培养基制备 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培
•
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。20.11.1520.11.15Sunday, November 15, 2020
•
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。01:44:0801:44:0901:4411/15/2020 1:44:09 AM
②愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排 列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的 薄壁细胞。
③再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培 养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过 程叫再分化。
三、实验过程
请阅读课本：32页图3-1。
离器官体、的组植织物、脱分化

愈 伤
再分化
根
细胞
组 营养、温度、芽
织 营养、温度、
组织、细胞等，培养在人工配制的培养基上， 给予适当的培养条件，使其生长、增值、分 化成完整植株的技术。
二、实验原理
2、植物细胞的全能性 植物细胞具有全能性，即生物体的细胞
具有使后代细胞形成完整植株个体的能力。 植物细胞表现出全能性的条件： ①离体状态 ②在一定的营养物质、激素和其他外界条件 （光照、温度）
酒精摇动
倾倒酒精
无菌水冲洗
升汞消毒
无菌水冲洗
倾倒升汞
特别提醒：接种过程必须始终在酒精灯旁进 行，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭 菌，操作过程中避免双手从培养皿上方移动。
特别提醒：每瓶内接种材料不宜过多（建议 4-5个），彼此之间留出一定空间，从而避 免互相污染。
实验具体操作过程
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
植物组织培养的污染
①细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较明显， 一般接种后1－2天即能发现。主要是大肠杆 菌和链球菌。
植物组织培养的污染
②真菌污染：菌斑呈绒毛状、絮状，界限 不明显，伴有不同颜色的孢子接种后3－10 天才能发现。主要是霉菌污染。
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
③氯化汞（升汞）—无菌水冲洗 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质 量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无 菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
实验具体操作过程
流水冲洗
实验具体操作过程
（三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子， 接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷 雾使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线 照射20分钟。
菊花的组织培养
一、项目介绍
菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物, 是我国的传统名花。
长期以来菊花采用分株、扦插等无性繁殖 方法进行繁殖。但是传统的繁殖方法易受环境 影响,繁殖周期长。
植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度 快等特点,可以用较短的时间和较少的空间生 产出大量的试管苗。
二、实验原理
1、植物组织培养 指在无菌条件下，将离体的植物器官、
•
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。20. 11.1501 :44:090 1:44No v-2015 -No v-2 0
•
日复一日的努力只为成就美好的明天 。01:44:0901:44:0901:44Sunday, November 15, 2020
•
安全放在第一位，防微杜渐。20.11.1520.11.1501:44:0901:44:09November 15, 2020
（二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
实验具体操作过程
2、表面消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻 刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理—无菌水冲洗
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数 为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外 植体取出，在无菌水中清洗
实验具体操作过程
3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行高压 蒸汽灭菌。 注意： ①温度为121℃时，维持15-20分钟。若灭菌时 间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。 ②某些生长调节剂如赤霉素等以及某些维生素 遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌， 而需要进行过滤灭菌。
实验具体操作过程
•
这些年的努力就为了得到相应的回报 。2020年11月15日星 期日1时 44分9秒01:44:0915 November 2020
•
科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。上午1时44分 9秒上 午1时44分01:44:0920.11.15
•
每天都是美好的一天，新的一天开启 。20.11.1520.11.1501:4401:44:0901:44:09Nov-20
二、实验原理
3、细胞分化 ①定义：在植物的个体发育过程中，细胞在形
态、结构和生理功能上出现稳定性差 异的过程。 ②实质：基因的选择性表达
③结果：形成各种不同的组织和器官
三、实验过程
请阅读课本：32页图3-1。
离器官体、的组植织物、脱分化
愈 伤
细胞
组
根 芽
植 物 体
织
外植体：离体的植物器官或组织片段
影响植物组织培养的因素
3、不同植物激素浓度的使用顺序和使用量
影响植物组织培养的因素
3、不同植物激素浓度的使用顺序和使用量
总结植物组织培养过程:
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤
再分化
芽
织 或 细胞分 细 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
植物组织培养过程示意图
上面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。
实验结果
➢5-7天，外植体膨胀、生长，颜色变浅， 若出现染菌，及时转瓶。
实验结果
➢2-3周，愈伤组织开始形成。
染菌5-7天后
染菌1-2周后
实验结果
➢3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。
实验具体操作过程
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微 生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些 明显的不同？ 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的 无机盐；