霉菌的形态观察
一、【实验目的】
1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法
2、了解四类常见霉菌（曲霉、毛霉、青霉、根霉）的基本形态特征
二、【实验原理】
1、霉菌
霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3~10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
2、PDA培养基
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它是一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
3、载玻片培养观察法（小室培养法）
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。
载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌记载载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。
培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。
这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期培养物。
三、【实验器材】
1、菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉 ( Rhizopus sp. ) ，
毛霉（ Mucor sp. ），培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物
2、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）
3、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，
解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，
酒精灯等
四、【操作步骤】
1.配置PDA培养基：
按配方配置马铃薯培养基200ml，其做法是先将马铃薯洗净去皮,再切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即马铃薯块可），先用一层纱布过滤，再用六层纱布过滤，取滤液，加热，加入葡萄糖补水至200ml。
将其分为两份各100ml，取其中一份加入琼脂，加热搅拌至琼脂融化，稍冷却均匀倒入20只试管中（每只约5ml），将剩余100ml与等量琼脂倒入100ml锥形瓶中。
加塞，包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出冷却备用。
2、载玻片培养观察法（小室培养法）
(1）、培养小室的灭菌：
如图1，将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，于110℃灭菌20~30分钟,烘干后备用。
图1 载玻片培养示意图
1 平皿
2 U型玻璃棒
3 载玻片
4 培养物
5 盖玻片
6 滤纸
（2）、琼脂薄片的制作：
取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6~7ml 注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。
通过无菌操作，用无菌刀片将其切成 1cmx1cm的琼脂块，用已用酒精灭过菌的镊子轻轻夹起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块
（3）、接种：
通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取（肉眼可见的）少量霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖
（4）、培养：
通过无菌操作，在培养小室中的圆滤纸上加 2～3ml 灭菌的20 %的甘油（用于保持平皿内的湿度 ) ，盖上皿盖，28 ℃正置培养一周。
（5）、镜检：
根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。
五、【注意事项】
载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少，同时尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。
六、【实验结果及绘图】
曲霉根霉毛霉青霉
四种霉菌形态特征图
菌种曲霉根霉毛霉青霉
形态特征营养菌丝具
有分隔；气
生菌丝的一
部分形成长
而粗糙的分
生孢子梗，
顶端膨大成
球状顶囊，
表面辐射出
一层或两层
小梗，小梗
上着生成串
的球形分生
孢子。
分生
孢子梗生于
足细胞上，
并通过足细
胞与营养菌
丝相连。
菌丝无隔、
多核、分枝
状，有匍匐
菌丝和假
根。
在假根
的上方直立
地生长出一
至数根孢囊
梗，其顶端
膨大成球形
孢子囊。
囊
的基部有囊
托，中间有
球形或半球
形囊轴。
囊
内产大量孢
囊孢子，有
性生殖时由
不同性别的
菌丝或匍匐
菌丝上生出
配子囊，配
子囊双双异
宗配合形成
一接合孢
子。
菌丝无隔、
多核、分枝
状，无假根
或匍匐菌
丝。
菌丝体
上直接生出
单生、总状
分枝或假轴
状分枝的孢
囊梗。
各分
枝顶端着生
球形孢子
囊，无囊托。
菌丝有横
隔，分生孢
子梗亦有
横隔，光滑
或粗糙。
基
部无足细
胞，顶端不
形成膨大
的顶囊，其
分生孢子
梗经过多
次分枝，产
生几轮对
称或不对
称的小梗，
形如扫帚，
称为帚状
体。
小梗顶
端有孢子。
四种霉菌形态特征表
【摄影】
青霉菌 10x10 根霉菌 10x10
曲霉10x10
帚状分支假根
足细胞
【绘图】
马铃薯去皮，切成块煮沸20~30min，然后用1层及6层纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至所需量，110℃灭菌20~30min。
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