14
N2=(n2-1+n2-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的 平均数值来计算。
n2-1
n2-2
N2=(n2-1+n2-2)/2
15Leabharlann N3=(n3-1+n3-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的 平均数值来计算。
n3-1
n3-2
N3=(n3-1+n3-2)/2
16
将计数板及盖玻片用流水冲洗，擦干， 重复上述步骤，对每个样品可计数三次， 再取其平均值。
29
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池 中央大方格内四角及中央中格内(即80个小方 格)的单胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左 及右又由右及左依次计数各小格内的细胞数。 一般可采取“数上线不数下线，数左线不数 右线”的原则处理。凡压方格的上线和左线 的细胞，统一算此方格内的细胞，而压方格 的下线和右线的细胞，统一不算此方格内的 细胞。
21
将计数板连同盖玻片一起取下，用细口 胶头滴管吸取稀释后的摇匀的单胞藻悬 液，迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片 的边缘，略挤胶头滴管让培养液利用液 体的表面张力，自行渗入。
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样品流入的量以充满盖玻片下面的空间为 宜，盖玻片下面不能有气泡存在，否则会 造成计数不准。多余的藻液会流入H形的凹 沟中。
对每个样品计数三次，再取其平均值。 N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3 N3=(n3-1+n3-2)/2
13
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的 平均数值来计算。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
血球计数板的使用
1
①血球计数板的原理和构造 ②方法与步骤
2
①血球计数板的原理和构造
Ⅰ构造 血球计数板是一种专门用于计算较大单细
胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻 片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下 凹的槽，构成三个平台。
3
4
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面刻有一个方格网。方 格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一 个大方格为计数室。这一大方格的长和宽 各为1mm，深度为0.1mm，其容积为 0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的 计数板。
28
样品添加到计数池后，静置5min。使藻细胞 沉降，否则，细胞呈悬浮状态，不处于同一 平面上，给计数造成不便。待单胞藻全部沉 降到计数室底部后，将计数板放在载物台的 中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后， 再转换高倍镜观察，仔细调焦，同时调节光 栅，必要时调节光源和反光镜角度，直至细 胞和纵横格线都清楚。计数并记录。
32
计数一个样品要从两个计数室中计得的 平均数值来计算，将计数板及盖玻片用 流水冲洗，吹干，擦净，重复上述步骤， 对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3 N3=(n3-1+n3-2)/2
17
将同一样品的计数结果，取平均值。代入下式， 求算单胞藻的密度：
N小格平均每小格内的细胞数=N/(5×16) 设每毫升中有x个单胞藻
x个
N小格×16×25个
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从试管中吸出培养液进行计数之前，要 将试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分 布均匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计 数的代表性和准确性，求得的培养液中 的单胞藻数量误差小。
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注意，当藻液浓度高时，为了便于计数，可 将藻液用消毒海水稀释后进行计数。
在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸 取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液（1000毫升 藻类用15毫升的鲁哥氏液固定）进行固定， 然后添加消毒海水稀释后计数。
8
把中央大方格的中方格再 分成小方格的分割线并不 只局限于中央大方格内， 而是一直延伸到正方形凹 槽的边缘，所以在其延长 线上的4个大方格中分割 线显得密集。
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25×16型的计数板 一般计数四个角和 中央的五个中方格 （5×16=80个小方 格）的细胞数。
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Ⅱ血球计数板的原理
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计数一个样品要从两个计数室中计得的 平均数值来计算，
1cm3
(1mm × 1mm ×
0.1mm÷1000)cm3
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm ×
0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
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②用血球计数板对藻细胞进行计 数的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否
干净。若有污物，则需用清水清洗，吹干， 用擦镜纸擦拭干净。 盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用 时用眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜 纸擦拭干净。 将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台 上，调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干 净。
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如果一个小方格内单胞藻过多，难以数清， 应当对培养液进行稀释以便于单胞藻的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL单胞藻培养 液，加入成倍的无菌水（消毒海水）稀释， 稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数 值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个 单胞藻细胞为宜。特别是在培养后期的样液 需要稀释后计数。
5
1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3
20mm×20mm×0.25mm=100mm3
6
25×16型的计数板
计数池中央的大格又 被双线划分成25个中 格，其中的每个中格 又被单线划分成16个 小格，中央大方格由 25×16=400个小方 格组成。
7
在血球计数板上，刻 有一些符号和数字(见 图一)，其含义是： XB-K-25为计数板的 型号和规格，表示此 计数板分25个中格； 0.10mm为盖上盖玻 片后计数室的高； 1/400mm2表示计数 室面积是1mm2，分 400个小格，每小格面 积是1/400 mm2。