– 鲎试验的正常反应需要中性的pH值、一定浓度的钠离子及二 价阳离子； – 用BET水稀释供试品可以解决绝大多数的抑制
• pH值
– 鲎试验的反应混合液（TAL+围对供试品迚行稀释
– 用缓冲液制备样品稀释液
– 用酸、碱或缓冲液来调节pH
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0.1Mg/ml葡聚糖（抗增液）
0.1Mg/ml葡聚糖 +E0.3（抗增液）
0.1Mg/ml葡聚糖
0.1Mg/ml葡聚糖 +E0.3
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0.1Mg/ml葡聚糖出现明 显的增强
0.1Mg/ml葡聚糖（抗 增液）不存在干扰
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表b 平行 管数 1 2 3 4 平行 管数 1 2 3 4
不符合CP要求，但符 合USP要求
符合CP要求，但不符 合USP要求 表c
¼ λ
2λ ＋ ＋ ＋ ＋ SE2λ ＋ ＋ ＋ ＋
溶液C（Es） λ ½ λ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 溶液B（Et） SEλ SE½ λ － － － － － － － －

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• 二价阳离子
– 在含有鳌合剂的样品制备中使用MgSO4或CaCl2缓冲剂可维 持Ca++、Mg++离子的浓度
• 蛋白和酶的改良
– 血浆和血清中的丝氨酸蛋白酶可经加热处理使其变性；
某些蛋白的变性或酶的抑制原料需要用超滤方法去除
• 内毒素损耗
– 在标准内毒素制备及使用过程，需要经常旋涡混合其溶液 – 避免使用对标准内毒素有吸附作用的实验器具
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干扰的表现
•
凝胶法
最理想的无干扰状冴
– FDA的鲎试验指南中规定，同一标准内毒素的阳性对照与阳性样品 对照系列的反应终点存在显著差异时，即可确定为存在干扰。
表a 平行 0.5λ≤Es ≤ 2λ；0.5Es ≤ Et ≤ 2Es 管数 – USP27规定无干扰条件： 1 2 0.5λ ≤ Es ≤ 2λ；0.5λ ≤ Et ≤ 2λ 3 光度法 4 – CP、USP规定无干扰条件： 平行 管数 50% ≤ R ≤ 200% 1 – FDA规定无干扰条件： 2 3 50% ≤ R ≤ 150% 4
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增强的来源和解决方法
•
来源
– β-葡聚糖是造成鲎试剂结果假阳性的一个已知来源。 美国药典BET法的要求： “除了内毒素，鲎试剂还与某些β-葡聚糖反应。一些经特殊制备的 鲎试剂不会与β-葡聚糖反应，应使用这种鲎试剂检测含β葡聚糖的 样品”
细菌内毒素检查的常见干扰及消除
湛江安度斯生物有限公司 2009年3月
BET干扰的普遍性
– 一项对人用药品与鲎试验相容性的研究证实了干扰
的影响范围，在所研究的品种中仅30%的药品可以 不经仸何处理直接迚行BET；有97%的干扰问题可 以通过稀释供试品的方法去消除。
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测结果仍为阳性，称之为假阳性
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抑制的来源
• 由内毒素激活的酶反应受抑制
– pH值不适宜 – 二价阳离子不足 – 酶的改良及活性不足
• 内毒素损耗
– 吸附
– 损耗
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抑制的解决办法
出现表b或表c的极端情冴均为不适宜的实验结果，需要检查实验条件。
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干扰的类型
• 抑制
– 供试品含有的内毒素浓度≥2倍检测试剂的灵敏度，但检测 结果仍为阴性，称之为假阴性
• 增强
– 供试品含有的内毒素浓度低于检测试剂灵敏度的1/2，但检
•
解决方法
– 湛江安度斯公司的TAL可以抵抗一般水平的β-葡聚糖干扰。 – 用湛江安度斯公司的抗增液复溶鲎试剂可以消除（1-3）β-D葡聚 糖的干扰。
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NC
E0.03
E3.0
E0.3
每个浓度的标准内毒素溶液分别与抗增液复溶的 鲎试剂及BET水复溶的鲎试剂反应
－ － － －
SE¼ λ － － － －
平行 管数 1 2 3 4 平行 管数 1 2 3 4
2λ ＋ ＋ ＋ ＋ SE2λ ＋ ＋ ＋ ＋
溶液C（Es） λ ½ λ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 溶液B（Et） SEλ SE½ λ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
¼ λ
－ － － －
SE¼ λ ＋ － － －
– CP2005规定无干扰条件：
•
2λ ＋ ＋ ＋ ＋ SE2λ ＋ ＋ ＋ ＋
溶液C（Es） λ ½ λ ＋ － ＋ － ＋ － ＋ － 溶液B（Et） SEλ SE½ λ ＋ － ＋ － ＋ － ＋ －
¼ λ － － － － SE¼ λ － － － －
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