表 １ 四因素三水平设计
因素 温度（ ｔ／℃） 储存容器中空气比例（％） 质 量 浓 度［ρ／（ｍｇ／ｍＬ） ］ 防腐剂
１
２
－ ２０
４
０
５０
０．２
０．８
ＮａＦ
无
３ ２０ ２５ ２．０ Ｎａ２Ｏ２
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Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ ２００７，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．２
１ 实验材料和方法
１．１ 仪器
［作者简介］ 马栋（ １９７８－ ） ， 男，甘肃天水人， 研 究 实 习员 ， 硕 士 研 究生， 主要从事法医毒物分析研究， （ 电话） ０２１－ ５２３５２９５５。
吉尔森 ４０２ 稀释仪、Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０ Ｎ 型顶空气相 色谱仪（ 配氢火焰光度检测器） 。 １．２ 材料
表 ２ 血液中乙醇均匀性检验结果［ρ／（ｍｇ／ｍＬ）］
样品号
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ 平均值
１ ０．７６３ ０．７４４ ０．７４２ ０．７３０ ０．７６０ ０．７６８ ０．７７０ ０．７８４ ０．７８２ ０．７９４ ０．７６７
２ ０．８００ ０．７６８ ０．７９２ ０．７４８ ０．７８５ ０．７２９ ０．７９０ ０．７７７ ０．７８１ ０．７６３
（ ３） 误差
５４次测定值标准偏差 Ｓ 总＝０．７７６ 总自由度： ｆ 总＝５４－ １＝５３
法 医 学 杂 志 ２００７ 年 ４ 月 第 ２３ 卷 第２ 期
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表 ４ 测定结果及统计表
组别 Ａ（ 浓度） Ｂ（温度） Ｃ（体积） Ｄ（防腐剂） 第一次 第二次 第三次
１
１
１
１
１
０．２０７ ０．２２６ ０．２２６
２
１
２
２
２
０．２０８ ０．２２４ ０．２４６
３
１
３
３
３
０．２０５ ０．２９６ ０．４０４
４
２
１
２
３
０．８００ ０．７６４ ０．７５４
５
２
２
３
１
０．７８８ ０．７５６ ０．７１１
６
２
３
１
２
０．７８３ ０．９００ ０．９５９
方差来源 样品间 样品内
表 ３ 方差分析结果
自由度 ９ １０
平方和 ０．００４ ０ ０．００３ ７
均方
Ｆ
０．０００ ４４ １．１９
０．０００ ３７
Ｆ０．０５（９，１０）＝３．０２。本例中 Ｆ＝１．１９＜Ｆ０．０５（９，１０）， 说明血液样 本之间无显著性差异即血液样品中的乙醇浓度是均 匀的。 １．７ 实验样本检测 １．７．１ 顶空气相色谱仪测定条件
参 照 卓 先 义 等［４］血 液 中 乙 醇 检 测 方 法 对 血 液 样 本 进行检测。 １．７．２ 工作曲线
使用吉尔森 ４０２ 稀释分配仪分别取 １００ μＬ ０．１５、 ０．８、１．０、２．０、３．０ｍｇ／ｍＬ 系列浓度对照品， 同时加 ５００ μＬ 叔丁醇（ ４０ μｇ／ｍＬ） 作为内标于 １０ ｍＬ 顶空瓶中， 加硅 胶垫铝盖密闭。每个浓度平行测定 ２ 份。在每次测定 样品的同时， 绘制工作曲线， 要求工作曲线的相关系 数 γ＞０．９９９。 １．７．３ 血液中乙醇含量测定
为了确保实验中出现的任何离群结果不能归咎 于样品之间的变异性 ， 我们以 ０．８ ｍｇ／ｍＬ 样本为例对 样本进行均匀性检验。检验过程和方法如下：
（ １） 从 ０．８ ｍｇ／ｍＬ 样本总体中抽取 １０ 个样 品用 于均匀性检验；
（ ２） 对抽取的每个样品， 在重复条件下测试两次； （ ３） 均匀性检验中所使用的乙醇含量测定方法与 稳定性考察中乙醇含量测定所使用的方法一致； （ ４） 采用单因子方差分析法对检验结果进行了统 计学处理， 检验及分析结果如表 ２ 和表 ３。
Ｃ、Ｄ 三因素最佳组合是 Ｂ２Ｃ２Ｄ１ 即 ４ ℃、储存容器中空 气 所 占 比 例 为 ５０％以 及 添 加 防 腐 剂 （ ＮａＦ） 的 情 况 下
保存血液样本稳定性结果最佳。
２．２ 测定结果的方差分析
（ １） 组间变异：
! ! ２
２
２
２
２
２
Ｓ组＝ ＝Ｓ０．２ ＋Ｓ０．８ ＋Ｓ２．０ ＝ ０．６０３ ＋１．７３９ ＋０．２５８ ＝１．８５９
法 医 学 杂 志 ２００７ 年 ４ 月 第 ２３ 卷 第２ 期
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血液中乙醇保存稳定性研究
马栋， 卓先义， 卜俊， 向平， 沈保华 （ 司法部司法鉴定科学技术研究所， 上海 ２０００６３）
［摘 要］ 目的 确定血液中乙醇最佳保存条件， 探讨影响血液中乙醇含量稳定性的主要因素。方法 对血液 保存的温度（ － ２０、４、２０ ℃） 、防腐剂（ ＮａＦ、无防腐剂、Ｎａ２Ｏ２） 、储存容器中空气所占比例（ ０％、２５％、５０％） 和血 醇质量浓度（ ０．２、０．８、２．０ ｍｇ／ｍＬ） 四个因素采用正交试验 Ｌ９（ ３４） 方法分组， 样本采用顶空气相色谱法进行测 定， 测定结果采用方差分析进行讨论。结果 在 ２０ ℃保存且不加入防腐剂的两组样本中血醇浓度变化明显， 其余变化不明显。结论 血液样本在 ４℃、储存容器中空气比例为 ５０％和加防腐剂（ＮａＦ）的条件下保存， 稳定 性最佳； 四个影响因素中温度为影响血液中乙醇含量稳定性的主要因素。 ［关键词］ 血液； 乙醇； 顶空气相色谱法； 稳定性； 正交试验 ［中图分类号］ ＤＦ７９５．１ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １００４－ ５６１９（ ２００７） ０２－ ０１１７－ ０３
对正交试验列表分列的九组实验样本每隔 １５ 天 抽取其中一小组进行一次测定， 样本配制同工作曲线 配制过程。
２ 结果和讨论
２．１ 九组血液样本六次测定结果及统计数据
测 定 结 果 及 统 计 见 表 ４。 初 始 浓 度 值 加 和 ＝
１．４０４＋４．５９６＋１２．１９２＝１８．１９２。
Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３ 值与初始浓度加和进行比较， 可知 Ｂ、
Ｒｅｓｅａｒ ｃｈ ｏｆ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ Ｐｒ ｅｓｅｒ ｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ Ｂｌｏｏｄ
ＭＡ Ｄｏｎｇ， ＺＨＵＯ Ｘｉａｎ－ ｙｉ， ＢＵ Ｊｕｎ， ＸＩＡＮＧ Ｐｉｎｇ， ＳＨＥＮ Ｂａｏ－ ｈｕａ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｊｕｓｔｉｃｅ， Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００６３， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｍａｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｔｈｅｎ ｔｒｙ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｂｌｏｏｄ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｕｒ ｃｒｕｃｉａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ （－ ２０， ４， ２０ ℃）， ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ （ＮａＦ， Ｎｏ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ， Ｎａ２Ｏ２）， ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ａｉｒ ｃｈａｍｂｅｒ ｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ （０％， ２５％， ５０％）， ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｌｏｏｄ （０．２， ０．８， ２．０ ｍｇ／ｍＬ） ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ． Ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｏｒｅｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９ （３４）ｍｅｔｈｏｄ． Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ＦＩＤ ｄｅｔｅｃｔｏｒ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ． Ｒｅｓｕｌｔ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｓｔｏｒｅｄ ｉｎ ２０ ℃ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｙ ｒｅｓｅｒｖｅａｔｉｖｅ， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｕｎｄｅｒ ｏｔｈｅｒ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｋｅｅｐｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｓｔａｂｌｅ ｉｓ ４ ℃ ｗｉｔｈ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｎｄ ｗｉｔｈ ５０％ ｏｆ ａｉｒ ｃｈａｍｂｅｒ ｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ． Ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｓ ｍａｉｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ ｂｌｏｏｄ； ｅｔｈａｎｏｌ； ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； ｓｔａｂｉｌｉｔｙ； ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ
１．４ 实验样本的配制 １．４．１ １００ ｍｇ／ｍＬ 乙醇储备液配制
精 密 称 取 ４．９９２ ｇ 乙 醇 对 照 品 于 ５０ ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 使 用 超 纯 水 定 容 至 刻 度 ， 得 ９９．８４ ｍｇ／ｍＬ 乙 醇 储 备液。 １．４．２ 血液样本的配制
分别在 ５００ ｍＬ 容量瓶中加入 １、４ 和 １０ ｍＬ 乙醇 储备液， 然后加全血定容至刻度， 混匀。得乙醇质量浓 度分别为 ０．２、０．８ 和 ２．０ ｍｇ／ｍＬ 的血液样本。每个浓 度 的 血 液 样 本 按 照 正 交 试 验 列 表 要 求 分 别 加 入 １％ ＮａＦ 和 Ｎａ２Ｏ２。 １．４．３ 血液样本保存