分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
五、分子生物学实验课—课程准备
1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（5班）
2、分装10ul（白色）、200ul（黄色）、1000ul（蓝色）枪 头并高压灭菌（ 2班）
3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。（2班）
4、配置100mlCTAB抽提液：配方见黑板。（5班）
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四、分子生物学实验课—课程考核
1、本课程为考查科目。总成绩为100分，由考勤、 实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节 结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的20﹪、 20﹪、 20﹪、 40﹪。
2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标 题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结 果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一 份实验报告。
分子生物学实验课PPT-曾令江-XXXX1116
2020/11/10
分子生物学实验课PPT曾令江 XXX1116
内容提要
1
分子生物学实验----课程介绍
2
分子生物学实验----课程内容
3
分子生物学实验----课程要求
4
分子生物学实验----课程考核
5
分子生物学实验----课程准备
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二、分子生物学实验—课程内容
实验一、DNA的提取及检测 实验二、PCR扩增目的基因及检测 实验三、目的基因片段的回收、连接 实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备 实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测 实验六、质粒DNA的抽提、酶切（生工专业选作） 实验七、RNA的抽提与检测（生科专业选作）
实验二：PCR扩增adk基因及检测
第一链cDAN的合成—用试剂盒
反应体系：
1: DEPC-treated water
9 ul
2: oligo(dT)18 primer
1 ul
3: Template RNA
2 ul
4: 5×Raction buffer
4 ul
5: RNase inhibitor
1 ul
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技术路线
甘薯材料（幼苗） 提取甘薯总RNA
反转录成cDNA第一链
提取甘薯DNA
引物设计 PCR扩增adk基因核心片段
胶回收adk片段
连接T载体 转化大肠杆菌DH5a
送测序及生物信息学分析
PCR检测筛选阳性转化子
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反应条件：
I） 94℃ II） 94℃
56℃
72℃ III） 72℃
5min
45S
45S
1min（33个循环）
8min
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胶回收
TIANGEN公司： 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒—-离心柱型 操作步骤按照试剂盒说明做。
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回收DNA片段与T载体连接
1、连接体系： T-载体 回收片段 灭菌蒸馏水 SolutionⅠ 总体积：
2、连接条件： 16℃连接过夜
0.5ul 2ul 2.5ul 5ul 10ul
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演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/10
三、分子生物学实验课—课程要求
1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间， 要求准时到实验课堂。
2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果， 包括电泳图片、照片、电子资料等。
3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。 如:离心机、移液器(枪)的使用。
4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验 台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁 小组最后收拾整理。
5、配制LB液体培养基400，LB固体培养基+AMP抗生素 600
6、研钵、液氮，抗生素配制等。
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实验一：甘薯DNA的提取
采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯 DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。 收集电泳图片
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反应体系：1：MiniQ H2O 2：10×PCR buffer 3：25mM MgCl2 4： 10mM dNTP mix 5：引物1(10μM) F-ADK 6：引物2(10μM) R-ADK 7：Taq(2 to 5 units/ul) 8：模板（cDNA） 终体积为
36.5ul 5ul 3ul 1ul 1ul 1ul 0.5ul 2ul 50 ul
一、分子生物学实验—课程介绍
分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快， 内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课， 是生命科学中公认的核心学科。
分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其 重要性，现已独立成一门单独学科，主要围绕能更 好培养学生的动手能力和创新能力。
我院从1997年开始开设本科生的分子生物学课程及 其实验课，2006年该课程已列为学校重点课程建设。 大三上期开设，学分1.5，27学时。
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6: 10mM Dntp Mix
2 ul
7: MVReverse Transcriptase
1 ul
total volume
20ul
反应条件：1: 42℃-60min; 2: 70 ℃ -5min
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实验二：PCR扩增adk基因及检测
每个小组做2个50ul体系