实验一 凝集反应
一、目的要求
1.掌握血清学反应概念、特点。
2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应
的实验方法及结果判定。
3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。
二、实验内容
1.直接凝集试验(玻片法)
——ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验
——类风湿因子检测(小组做)
三、凝集反应相关知识
（一）概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结 合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物， 称为凝集反应。
免疫学实验
（ 供临床医学本科用） 基础医学院免疫学教研室 李念虹
Email: lnh666" lnh666@
教材
高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ≪免疫学实验≫ 科学出版社，2008年6月 主编 朱道银，吴玉章
临床医学本科实验内容及安排
实验课内容 学时数 录像
1 凝集反应
2 沉淀反应 3 免疫标记技术 4 免疫酶斑点试验
4
4 4 4 有 有 有
非临床医学本科实验内容及安排
实验课内容 1 凝集反应
学时数 4
录像
2 沉淀反应
3 免疫标记技术
4
4
有
有
一、免疫学实验注意事项
1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。
2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验室 秩序，按要求完成实验。 3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约； 若损坏实验用品，要及时报告。
1.材料 已知Ab：标准血清 —— 抗A、抗B 待测Ag：红细胞血型抗原
2.操作步骤
(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约 2～5%红细胞(RBC)悬液； (2)准备1张载波片； (3)加血清(Ab)各1滴；
(4)加RBC各1滴；
(5)摇晃混匀；
(6)结果判断(10-15分钟后)。
在白背景 上观察
用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。 已知Ag,测Ab，为半定量实验；
用途：辅助诊断肠热症等。
2.间接凝集反应
RBC——间接血凝试验 用途：某些病毒感染和变态反应患者血 清中的相抗体量。 乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。
间接凝集抑制试验 ——妊娠试验
（已知）
（已知）
（已知）
（已知）
反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。
四、实验操作内容 （一）玻片法—— ABO血型鉴定（每人做） 用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。 ABO血型系统
血型 A型 B型 AB型 O型 红细胞表面的血型Ag A B A、B — 血清中的血型Ab 抗B 抗A — 抗A、抗B
已知Ag
2.检测步骤： (1)取黑底纸片三片； (2)加待测血清、阳性和阴性对照血清各1滴； (3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀； (4)5分乳胶凝集）； 阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。
完成实验报告
实验一 凝集反应
一、直接凝集反应（玻片法）—— ABO血型鉴定 1.材料 2.操作步骤
(3)在白色背景上观察效果较好。
（二）间接乳胶凝集试验
—类风湿因子检测
类风湿关节炎患者血清中存在：
变性IgG — Ag
抗变性IgG抗体(类风湿因子) — Ab
临床上用检测类风湿因子以辅助诊断
类风湿关节炎。
1.材料 已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG) 待测Ab：待检血清中的类风湿因子
待测Ab
4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸
内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。
5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生
做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检 查认可后，值日学生方可离去。
二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。
三、要求
1.严肃认真。
颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素
· 颗粒性抗原： 光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬 液，如细菌、RBC等。
· 可溶性抗原： 光镜下无形态，肉眼观呈澄清 透明，如蛋白质、多糖抗原等。
（二）凝集反应类型
1.直接凝集反应
2.间接凝集反应
1.直接凝集
——玻片法
已知Ab,测Ag，为定性实验； ——试管法（如肥达氏反应）
3.结果判断（自己的血型）
4.实验讨论 二、间接凝集反应——类风湿因子测定
1.材料
2.操作步骤 3.结果判断（自己的血型）
4.实验讨论
思考题 1.试述血清学反应、凝集反应的概念。 2.简述凝集反应的类型、用途及实例。 3.如何判断ABO血型检测结果？
凝集 不凝集
3.结果判断 凝集者：出现红色颗粒状或块状凝集物； 不凝集者：呈红色均匀混浊。 (1)若抗A凝集，抗B不凝集 —— A 型血
(2)若抗A不凝集，抗B凝集 —— B型血
(3)若抗A、抗B均凝集 —— AB型血
(4)若抗A、抗B均不凝集 —— O型血
4.注意事项
(1)适度的RBC悬液浓度，约2-5%； (2)抗A和抗B不能混用；
2.多想、多看、多做。
3.当堂完成实验报告。
四、Ag-Ab反应的相关知识 血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。 由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故 称之为血清学反应。 1.Ag-Ab反应的基本原则 （1）用已知抗体检测未知抗原； （2）用已知抗原检测未知抗体。
2. Ag-Ab反应的特点： （1）特异性 （2）可逆性
（3）可见性
可见性
Ag-Ab比例合适，形成大分子免疫复合物。
出现肉眼可见的凝集物
3.影响Ag-Ab反应的因素
（1）电解质：0.85% NaCl
（2）酸碱度：pH6～8
（3）温度：37℃
4.Ag-Ab反应类型：
（1）凝集反应
（2）沉淀反应 （3）补体结合反应
4大经典免疫实验
（4）中和反应
（5）免疫标记技术