2.基本技术路线
①基因的选择与实验设计
根据表达谱数据库选择5000-10000 个与发育及疾病相关的基因，制备药 物筛选芯片。
②芯片的制备
③细胞的培养与药物刺激
根据目的药物及表达谱芯片数据库中细胞 表达谱选择适当的细胞系，用适当计量的药物 加入细胞培养液中，不同的时间取样，抽提刺 激前后的mRNA。
二 微生物学筛选方法
(抗肿瘤抗生素)
1.噬菌体法 2.细菌变种法 3.抗代谢法
1.噬菌体法
噬菌体：是一类能感染微生物的病毒
（1）抗噬菌体法：干扰DNA代谢的抗生素如放线菌 素、博来霉素常能抑制噬菌体在细菌细胞内的生长， 从而不产生噬菌体颗粒而出现抗噬菌体的现象。
（2）溶原性菌诱导法：除烈性噬菌体外，还有一种 噬菌体，其基因组直接螯合到细菌染色体DNA，不复 制，因其大部分基因功能受到了“阻遏物”阻抑， 这种带前噬菌体的菌株称温和性或溶原性菌。但是 当“阻遏物”的量由于细胞内或环境因子（物理、 化学）而降低时，溶原性就不能维持，前噬菌体开 始生长，是细菌裂解，称为诱导作用。一些抗肿瘤 抗生素有诱导能力。
应用：药物体内初筛。
模型建立方法
实体瘤建立 1.小块瘤体接种法 2.肿瘤细胞悬液接种法 3.培养细胞移植法
治疗方案：接种后生长至可触及即可治疗，依药物 特性及研究目的确定方案，可给药一次，或连续 几次，或一周几次连续几周。
疗效评价： 肿瘤抑制率＝（对照组瘤重－给药组瘤重）/对照组
瘤重×100％
腹水瘤建立及评价：
（3）用碘酒、酒精消毒蛋壳。敲碎蛋壳把鸡胚移入平皿中， 加入EagleFs培养液5-10ml，然后，可选择在鸡胚尿囊膜血管 网的任何位置放置小块明胶海绵作为筛选抗血管生成药物的 载体，然后加入不同浓度的血管生成抑制剂。
（4）于加药后24h、48h和72h分别在显微镜下观察药物作用 结果，并照相。
（5）血管计数。可结合自动图像分析系统、摄像等技术完成
常用宿主动物： 裸小鼠
（“活的试管”）
特点：先天无毛，无胸腺，T淋巴细胞功能 完全缺失，对异种移植不产生排斥反应。
缺点：费用高，饲养条件高，不宜大量繁殖。 一般不用于初筛。
应用：观察药物对癌细胞逆转作用， 抑制增殖及诱导凋亡作用。
C57BL/6小鼠
特点：黑毛，体型小，性情温顺， 易饲养，药敏性好，为研究 Lewis肺癌首选。
B
A
1600 a
b
1400
未处理组
rapa处理组
Tumor
Valume 1200
(mm3)
顺铂处理组 rapa联合顺铂处理组
C
1000

800
b
c
600 d
400
200
days
0
11 32 5 3 7 4 9 5 11 6 137 158
六 基因芯片技术
1.原理
是一种建立在杂交测序基本理论上的全新 技术，它利用固定在芯片上的几万至几十万 条探针与样品进行杂交，在一步实验中获取 大量的信息。
④大白鼠饲养与药物刺激
用常规方法饲养大白鼠，用适当剂量的 药物喂养大白鼠，不同的时间取大白鼠的适当 器官（根据所筛选的药物而定），抽提刺激前 后的mRNA。
⑤刺激前后的mRNA的制备及标记 ⑥芯片杂交及扫描 ⑦数据分析及生物信息学分析
用表达谱数据库及配套软件分析受药物 诱导的基因，针对这些基因的功能确定药 物的疗效。
体内：动物眼角膜囊 地鼠颊囊 裸鼠外耳皮下 鸡胚绒毛尿囊膜
鸡胚绒毛尿囊膜模型
• 鸡胚的生物学构造
尿囊
卵黄囊
对照组
低浓度药物实验组
中浓度药物实验组
高浓度药物实验组
操作步骤：
（1）于实验前72h孵育受精蛋
（2）实验进行前以照蛋箱透照孵育的种蛋，凡已正常发育的 种蛋可照见胚胎的影子，用铅笔做记号，弃取未发育种蛋
2.细菌变种法
(1)人工培育变种
如:使细菌模仿肿瘤细胞的某些代谢特点 使细菌对核酸或蛋白合成抑制剂敏感
(2)检测突变作用
如:依赖链霉素的菌株
3.抗代谢法
抗代谢物在无机氮源的合成培养基中显 示抗菌作用，而在普通有机氮源的营养培养 基中无抗菌作用（因为有机氮源可将具有抗 菌作用的物质代谢），利用此特点，选择无 机氮源试验有抗菌作用的物质，作为抗代谢 的初筛方法。
抗肿瘤药物筛选课件
内容提要
一 细胞筛选 二 微生物学筛选方法 三 精原细胞法 四 利用分子靶点筛选 五 动物模型 六 基因芯片技术
CCK-8法
2.集落形成法：
注意：适合贴壁细胞，细胞要分散均匀，操作 要柔和。
3.台盼蓝排斥试验
特点：悬浮细胞较方便，贴壁细胞要 进行消化，此步误差大。
血管生成抑制率＝（对照组血管面积－药物组血管面积）/对 照组血管面积×100％
2.以端粒酶为靶点的药物筛选
端粒：真核细胞染色体末端的特殊结构。维 持染色体稳定性。
“生命的时钟” “有丝分裂的计数器”
端粒酶功能：通过其逆转录酶活性复制和延 长端粒DNA来稳定染色体DNA端粒的长度。
端粒酶活性测定方法
评价：对照组通常2-3周内死亡，治疗组一般观察50d左右，计 算生命延长率。 生命延长率＝（治疗组平均存活天数－对照组平均存活天数） /对照组平均存活天数×100％
注意事项：
1.取材时取实质部位，不要取坏死、液化部位，防止污染。 2.试验前先饲养裸鼠一周，以适应新环境，若死亡超过10%不 可用，一般18-22g，4-6周龄。 3.饲养环境及鼠笼、垫料、饲料严格消毒 4.保持恒温，一般25±1℃，湿度40-60%，每天10h光照、14h 黑暗。
三 精原细胞法
(抗生素和植物药)
1.建立依据
B型精原细胞具有高度敏感性
2.实验方法及判定
22－28g雄性小鼠，药物直接注入睾丸， 不同浓度，每一浓度用2－3只，注射3天，处 死动物，睾丸固定，石蜡包埋切片，苏木精 －伊红染色，显微镜观察。
四 利用分子靶点筛选
1.抑制血管生成的筛选模型 体外：血管内皮细胞培养
端粒酶抑制剂
3.细胞凋亡通路靶点
细胞周期调控靶点
与侵袭相关的靶点
耐药相关的分子靶点
靶点选择原则：特异性、有效性、综合 性、个性化
五 动物模型
整体动物实验法是评价一个药物是否有效 的最主要方法
整体动物在肿瘤药理学研究中的作用： 1.研究新开发药物对肿瘤的防治作用； 2.抗肿瘤药物筛选及抗肿瘤机理探索； 3.探索药物和目前常规肿瘤治疗方法的 综合应用以提高疗效。