[3] Akimitsu Maeda, Shuichi Tsuruoka , Kentarou Ushijima, Yoshikatsu Kanai ,Hitoshi Endou, Kazuyuki Saito , Etsuko Miyamoto, Akio Fujimura. Drug interaction between celecoxib and methotrexate in organic anion transporter3–transfected renal cells and in rats in vivo.European Journal of Pharmacology 640 (2010) 168–171
重复1 重复2 重复3 重复4
10μmol/L MTX
1μmol/L MTX
0.1μmol/L MTX
溶解相应药物所需
DMSO浓度 溶解相应药物所需 溶解相应药物所需
DMSO浓度
DMSO浓度
重复1 重复2 重复3 重复4
空白对照
空白对照
空白对照
溶解相应药物所需
DMSO浓度 溶解相应药物所需 溶解相应药物所需
[5]郑虎.药物化学.北京：人民卫生出版社，2008.1:241-242
谢谢
小肠粘膜上 皮细胞
MTX可以看做是由叶酸中蝶啶基中的羟基被氨基取代后 的叶酸衍生物[5].
MTX是二氢叶酸还原酶的抑制剂(为叶酸的 拮抗剂，和二氢叶酸还原酶的亲和力比二 氢叶酸强1000倍）。阻止二氢叶酸还原为 活化的四氢叶酸，使胸腺嘧啶核苷酸和嘌 呤核苷酸的合成原料耗竭，抑制DNA和 RNA的合成，从而抑制细胞的增生和复制， 起到细胞毒作用。 [1]. [4].
分子结构：
甲氨蝶呤主要作用[1]
1 MTX的细胞毒（抑制肿瘤）作用 2 MTX通过腺苷诱导免疫抑制作用 3 MTX抑制免疫炎症细胞增生及诱导凋亡 4 MTX影响细胞因子及其拮抗剂 5 抑制中性粒细胞的趋化作用 6 MTX对环氧化酶及脂氧化酶的作 7 MTX对蛋白水解酶及其抑制物的作用
MTX的细胞毒作用
1.叶酸[5].
叶酸（folic acid;pteroyl-glutamic acid ）也称 蝶酰谷氨酸 ，是维生素B复合体之一，相当于蝶 酰谷氨酸（pteroylglutamic acid，PGA），是米 切尔（H．K．Mitchell，1941）从菠菜叶中提取 纯化的，故而命名为叶酸 。
2.叶酸的作用[5].
公司
徽标
甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)
汇报人：李宏斌
汇报内容
1. 甲氨蝶呤理化性质 2. 甲氨蝶呤的细胞毒作用 3. 实验设计
甲氨蝶呤理化性质
分子式：C20H22N8O5 分子量：454.44 性质：熔点195°C。水溶性Insoluble. <0.1 g/100 mL at 19°C 性状：橙黄色结晶粉末。 溶解情况：微溶于水。几乎不溶于乙醚、乙醇、 氯仿。 用途：抗叶酸制剂，为基本抗肿瘤药物。系联合 化疗方案中常用的周期特异性药物。用于急性白 血病，绒毛膜上皮癌等。 制备或来源：由6-溴甲基喋呤与对甲氨基苯甲酰 麸氨酸缩合而得。 [1].[5].
DMSO浓度
DMSO浓度
3.细胞观察 铺板上药细胞分别于24h 36h 48h 72h光镜观察细胞形态数量等。
参考文献
[1].周惠琼，昊东海.甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎作用机制的研究进展.中国 药物与临床，2004，7（4）
[2]于晓明，张维冰，张丽华，张玉奎. 用氨甲蝶呤偶联琼脂程杂志，2007, 27 (10) : 70～74
[4] Joseph R. Bertino, MD, Professor, Interim Director. Cancer research: from folate antagonism to molecular targets. Best Practice & Research Clinical Haematology 22 (2009) 577–582
叶酸的活化形式四氢叶酸是体内一碳单位转移酶 的辅酶，分子中N5,N10是一碳单位的结合位点， 一碳单位在体内参加嘌呤，胸腺嘧啶核苷酸等多 种物质的合成。叶酸缺少时，核酸的合成受到抑 制。
3.活化过程[5].
蝶酸-L-谷氨酸羧基肽酶
二氢叶酸合成酶
二氢叶酸还原酶
叶酸（蝶 酰多谷氨 酸）
蝶酰单谷氨 酸
二氢叶酸 四氢叶酸
MTX
2.蝶酰单 谷氨酸
3.二氢叶酸
1.叶酸 5.四氢叶酸
4.二氢叶酸 还原酶
实验设计
一、问题的提出 1.甲氨蝶呤对于体外培养的细胞是否有明显的细胞毒抑制作用. 2.作用细胞的有效浓度. 二、实验过程 1.甲氨蝶呤溶解 查阅文献，参考相关实验确定溶解药物的方案。由于文献所用甲氨 蝶呤多为甲氨蝶呤的注射液,且实验多为动物实验。可以直接用注射 水溶解（或生理盐水），对于原药的溶解，国家药典说明可以溶于盐 酸，但低PH不于细胞培养，查阅相关公司产品，并经过试验，确定 原药可以溶解于DMSO。 2.浓度设计 母液配制：称取4.5mg MTX溶于1ml 100%DMSO,稀释至10ml.即 MTX浓度为1mmol/L,DMSO浓度为10%。 稀释：将母液分别稀释至药物浓度为10μmol/L 1μmol/L 0.1μmol/L， 对应DMSO浓度为0.1%0，0.01%,0.001%. 为了排除DMSO本身对细 胞的作用，另设置一对照为空白对照。