药学院药物化学实验室手册分析实验室要求一使用仪器设备时，要认真阅读技术说明书，熟悉技术指标、工作性能、使用方法、注意事项，严格遵照仪器使用说明书的规定步骤进行操作。

二初次使用仪器设备人员，必须在熟练人员指导下进行操作，熟练掌握后方可进行独立操作。

三实验时使用的仪器设备及器材，要布局合理，摆放整齐，便于操作，观察及记录等。

四电子仪器设备通电前，确保供电电压符合仪器设备规定输入电压值，配有三线电源插头的仪器设备，必须插入带有保护接地供电插座中，保证安全。

五使用仪器设备时，其输入信号或外接负载应限制在规定范围之内，禁止超载运行。

六光学化学仪器及其配件，使用时要轻拿轻放，防止震动。

切勿用手触摸光学玻璃表面。

发现灰尘及脏物时，不得用手或抹布擦试，必须使用专用品或专用工具清除。

七有些仪器设备不宜在磁场或电场中操作使用，必须采取屏蔽措施，防止仪器设备损坏或降低测量精度。

八机械类仪器设备，使用前必须进行空载运转确保无故障后方可加载使用。

用前润滑，用后擦试干净，注意日常维护、保养。

九仪器设备不准随意拆改或解体使用，确因需要开发新功能或改造更新等，需按分级管理权限，履行审批手续后再实施。

十经常进行仪器设备的保养与维护，并存放在干燥通风之处，待用时间过长仪器设备，应定期通电开机，防止潮霉损坏仪器设备其零部件。

十一大型精度、贵重仪器设备技术指标定期校验和标定制度，保持应有的技术指标。

做好使用原始记录。

高效液相色谱仪的使用高效液相色谱：是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

客队样品做定性定量分析。

高效液相色谱原理：色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。

其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。

当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。

由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。

与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。

高效液相色谱使用方法：一：高效液相色谱使用流程(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows xp,并运行Bootp Server程序。

2、打开液相色谱各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与液相色谱普通讯，进入的工作站。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面(如果已经在工具栏上就不用此操作了)。

5、把流动相放入溶剂瓶中。

6、打开Purge阀。

7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

8 、设Flow：5ml/min，单击OK。

9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭 Purge valve。

11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。

12、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。

也可输入停泵的体积。

单击Ok。

（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis ”外的三项，单击Ok，进入下一画面。

2、方法信息：在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。

单击Ok 进入下一画面。

3、泵参数设定：（以二元泵为例）在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。

在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

单击Ok进入下一画面。

4、自动进样器参数设定: 选择合适的进样方式,进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号。

“Standard Injection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。

“Injection with Needle Wash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。

“Use injector program”---可以点击Edit 键进行进样程序编辑。

点击Ok进入下一画面。

5、柱温箱参数设定: 在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。

点击ok进入下一画面。

6 FLD检测器参数设定:色谱条件：样品：P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10。

进样体积：5ul。

柱温箱: 30℃。

EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10。

响应时间=4s. 停止时间：出峰完毕。

Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Zero Order。

Emission: 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order。

PMT: 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值。

Peak width”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。

Multi Ex ：多波长及光谱（激发）。

Multi Em：多波长及光谱（发射）。

同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

7、在“ Run time checklist ”中选中“Data acquisition”，单击Ok。

8、单击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。

9、从菜单“View”中选中”Online signal” ,选中Windows 1,然后单击Change 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows 2)。

10、从“Run control ”菜单中选择“Sample info”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Data file ”中选择“Manual”或“Prefix”。

区别: Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。

Prefix—在Prefix 框中输入前缀，在Counter 框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。

11、从Instrument 菜单选择System on。

12、等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Run method”，进样。

（DAD, VWD色谱图如下所示：（三）、数据分析方法编辑:1、从“View”菜单中，单击“Data analysis”进入数据分析画面。

2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，如下图所示。

单击Ok。

3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项，。

从Ranges中选择Auto scale及合适的显示时间，单击ok,或选择”Use Ranges”调整。

反复进行，直到图的比例合适为止。

4、积分:(1)、从“Integration”中选择“Auto integrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“Integration Events”选项，选择合适的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject(2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。

(3)、如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

(4)、单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。

5、打印报告:(1)、从“Report”菜单中选择“Specify report”选项，进入如上画面。

(2)、单击“Quantitative Results”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。

(3)、单击Ok.(4)、从“Report”菜单中选择“Print report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report 底部的“Print”钮。

(四)、关机: 关机前，用 100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。

[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down关)2流动相的选择：高效液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。

它是影响分离的一个非常重要因素。

在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。

1：所选用的流动相溶剂要有一定的化学稳定性，不与固定相和样品组分起反应，其纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求。

2：溶剂应当不干扰检测器的工作，溶剂应与检测器匹配，选择不影响检测器正常工作应选择在测定波长范围内无吸收的流动相。

3：在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。

4：溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。

5：从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。

高香液相色谱注意事项：1：开机操作：(1)、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server(一般启动时已打开)；(2)、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时(有六行字符)，打开工作站(先打开On line)；(3)、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关(需用针捅抽)，控制流量大小，以能流出的最小流量为准；(4)注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。