3.cDNA策略：
由组织细胞中表达mRNA，逆转录合成cDNA片段，称为表达序 列标签（EST），将收获EST定位后，构建的图称为转录图， 是人类基因图雏形。
目前对人类基因组结构的认识
1. 人类基因组DNA全长约3×109bp，相当3600cM。其中仅有
约5%的序列为编码序列（编码蛋白或tRNA、rRNA等）。
1．连锁分析
两个基因如连锁，则重组值＜50%，且重组值与遗传距离成正比。 两个基因如非连锁，则重组值=50%，即随机组合。
2.体细胞杂交
人/鼠融合细胞的特点： 融合细胞兼有有双亲细胞染色体，但鼠一方染色体一般全部保留， 而人一方染色体在细胞增殖过程中优先丢失，以至最后仅剩少数几条， 乃至1条人染色体是基因定位的好材料。结合染色体显带和生化分析技术， 可把某些生化性状决定基因定位在保留的一条染色体上。
基因图（gene map）
在序列图基础上，用不同方法测定各个基因所在区域位臵。
基因图测定方法：
1.CpG岛的应用：
大多数持家基因和40%组织特异性基因5’端均存在CpG岛序列。 制备探针进行染色体涂染，间接指示基因位臵分布。
2.计算机识别：
研发计算机GRAIL系统，可识别每个基因区的外显子-内含子 接头区保守序列。
通过单拷贝DNA序列 标定部位（STS）作 路标来确定随机长度 的DNA片断在染色体 上的排列顺序。这些 克隆DNA片断连接起 来，形成重叠克隆群 （Conting），再将 一个个（Conting)相 连成线状，覆盖整个 染色体。
序列图（seguence map）
是通过对基因组DNA进行序列分析而建立的图谱。
2. 人类基因组中约有2-2.5万基因，其中编码蛋白质的外 显子只占基因组DNA的1%，内含子则占24%。不同个体间， 基因编码仅有0.01%的差异。 ３.基因在各个染色体上的分布是不均匀的，17、19、22 号染色体基因密度最高，而4、13、18、X、Y染色体基因 密度最低。人类基因组中约20%的区段是没有基因的“沙 漠”。
第二代 短串连复制序列长度多态(STR) 第三代 单核苷酸多态（SNP）
ห้องสมุดไป่ตู้
物理图（physical map）
是确定各种遗传标志之间的物理距离的图谱，以碱基 对的数量表示。


DNA序列标定部位（seguones tagged site, STS) 重叠克隆群（conting） YAC (yeast artificial chromosome) BAC (bacterial artificial chromosome)
后基因组计划 （past-genome project，PGP）
人类基因组多样性计划
人类基因组的多样性（种族多样性、族群多样性、个体特异性）。
功能基因组学（蛋白组学） 研 究 领 域
绘制基因表达图
比较基因组学
各种模式生物基因组序列的比较，生物基因组进化的连续性分析。
环境基因组学
研究与环境因素相关的疾病易感性基因。
3.原位杂交
是核酸分子杂交技术在基因定位中的应 用。用经放射性同位素标记的探针，同 染色体标本载玻片上原位变性的染色体 DNA进行分子杂交，通过放射自显影来检 测与探针杂交结合的染色体同源序列， 依据放射性探针在染色体上的显影位臵 进行基因定位。
荧光原位杂交（FISH）
4.放射杂种
基因克隆
从基因组中把某一基因用一定方法分离出来， 以便进行单一基因精细结构和功能的研究。
2.定位克隆
3.候选克隆
分为 定位候选克隆
功能候选克隆
从系列候选基因克隆中， 鉴定某遗传病决定基因克隆的方法：
⑴特异突变筛选法 ⑵在体外恢复正常表型法 ⑶构建小鼠疾病模型法
两种技术路线：
1.公共序列路线
在物理图基础上，将各个BAC克隆片段切成更短的片段，形 成亚克隆分别进行测序，再将相互重叠的读出序列组装成连 续重叠线。
2.“鸟枪法”测序路线
直接将基因组DNA分割成20kb左右的小片段进行随机测序， 再用超级计算机组装成重叠线。所形成的序列图称celera 序列。…………… ACGTCCGATCGGTTCATGCC TCGGTTCATGCCAATGCCGTCC…………
第三章 人类基因组学
基因组（genome）:一个生命体遗传物质的总和。
生殖细胞含1套基因组
体细胞含 2套基因组
1套来自父本生殖细胞 1套来自母本生殖细胞
完整的人类基因组包含： 1-22号常染色体 核基因组 X和Y染色体
线粒体基因组
基因组学 （genomics）
是从基因组整体层次上系统地研究各生物种群基因 组的结构和功能及相互关系的学科。 基因组学研究内容的三个基本方面： 结构基因组学 （structural genomics） 功能基因组学 （functional genomics） 比较基因组学 （comparative genomics） 由此又派生出其他研究分支。
人类基因组计划
（ human genome project, HGP）
HGP的科学目标：
测定组成人类基因组的全部DNA序列， 从而为阐明人类所有基因结构与功能、 解码人类生命奥秘奠基。
HGP的技术成果:
主要体现在对人类基因组整体结构的
认识，即人类基因组遗传图、物理图、 序列图的完成，奠定了人类结构基因 组学基础。而人类基因图的完成，仍 有大量工作要做。
遗传图（genetic map）
又称连锁图（linkage map），是将每条染色 体上的基因或遗传标记的相对位臵经连锁分析确 定下来，构成图谱。 连锁图中两个基因间图距以单位厘摩（cM）衡量。 1厘摩（cM）=减数分裂时两个基因间重组值为1%。 人类基因组全长3600 cM。
遗传标记： 第一代
限制片断长度多态（RFLP）
基因克隆的三种策略：
功能克隆（functional clonins） 定位克隆（positional clonins） 候选克隆（cardidate clonins）
1.功能克隆
⑴根据目的遗传性状的特征，分析决定基因的功能， 推测有关蛋白质。 ⑵分析纯化这一蛋白质，并测出部分氨基酸顺序。 ⑶根据遗传密码推测可能的mRNA序列。 ⑷设计相应的寡核苷病基因组学
分离重要疾病的致病基因与相关基因并确定其致病机制。
药物基因组学
研究药物多态性
生物信息学
应用数学与计算机科学检索、获取生物学数据并加工、存储、分析。
基因定位与克隆 （gene mapping and cloning ）
基因定位：
用一定方法，将各个基因确定到染色体的实际位臵。
主要方法 连锁分析（linkage analysis） 体细胞杂交（somatic cell hybridization） 原位杂交（hybridization in situ） 放射杂种（radiation hybrid） 计算机识别（computer identify）