局限
难以早期诊断
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第二节 病毒感染的微生物学检查法
形态学 病毒的分离鉴定
在培养细胞中增殖的鉴定指标
病毒成分的检测 病毒抗体的检测
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（一）病毒的形态学检查
电子显微镜（ EM）
免疫电镜, IEM
光学显微ห้องสมุดไป่ตู้（CM）
包涵体 内基小体（Negri body）
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毒力检测
半数致死量 LD50 半数感染量 ID50
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二、检测病原菌成分
抗原的检测 核酸的检测
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（一）抗原的检测
利用已知的特异性Ab检测Ag的方法 常用的方法有
玻片凝集 协同凝集试验 ELISA 免疫荧光法
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ELISA
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（二）核酸检测方法
聚合酶链反应（PCR） 核酸杂交技术
Medical Microbiology
医学微生物学
Department of Microbiology, HMU 哈尔滨医科大学 微生物学教研室
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DDeeppaarrttmmeenntt ooff MMiiccrroobbiioollooggyy,, HHaarrbbiinn MMeeddiiccaall UUnniivveerrssiittyy
Southern blot Northern blot Dot blot In situ hybridization
基因芯片(Gene chip) 16S rRNA
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16sRNA基因序列分析
只存在于原核细胞型微生物的染色体基因中 16sRNA，23sRNA, 5sRNA 可变区和保守区
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MIC & MBC
最低抑菌浓度，MIC 最低杀菌浓度，MBC
全自动分析仪
全自动细菌鉴定仪
全自动生化分析仪
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（五）检测毒力-动物实验
1. 常用动物
Mouse Guinea Pig Rabbit Dog Monkey
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接种途径
皮内 皮下 腹膜内 静脉 颅内 椎管内 鼻内 灌胃
hooded Bunsen burner
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细菌动力的检测
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化脓性球菌
葡萄球菌
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链球菌
肠道杆菌
细菌形态无特异性可采用生化 学检查法-鉴别细菌的重要方法
沙门氏菌
大肠埃希菌
志贺菌 实用文档
（二）生化试验
糖发酵试验
H2S试验 枸橼盐利用试验
鉴定中最重要的生化反应※ 乳糖发酵试验
肠道非致病菌（埃希菌属） 发酵乳糖、产酸产气＋
抗原 核酸
检测患者血清中特异性抗体
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一、细菌学诊断
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（一）形态学检查
1. 光学显微镜检查法：细菌染色检查法
革兰染色法 抗酸染色法 负染法
2. 暗视野检查：用于检查活菌、螺旋体及其动力 3. 荧光显微镜
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脑脊液的直接涂片染色-肺炎链球菌
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链球菌
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淋病奈瑟球菌-脓液直接涂片
肠道致病菌（志贺菌属、 沙门菌属等）不发酵乳糖 —
（三）血清学鉴定
利用含已知的特异性抗体的免疫血清， 检测未知的细菌抗原，对细菌进行种的 鉴定 志贺菌属、沙门菌属
常用方法是玻片凝集试验
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（四）药物敏感试验
测定抗生素或其他抗微生物 制剂在体外抑制细菌生长的 能力
方法： 扩散法、稀释法
保守区：所有的细菌所共有 可变区：属和种的特异性
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PCR
Gene Chip
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三、抗体的检测
用已知细菌或其Ag检测相应的特异性Ab及其量 的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断
急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍 有诊断价值
方法
玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、 冷凝集试验、ELISA
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结核分枝杆菌
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霍乱弧菌
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暗视野显微镜
钩端螺旋体
肺炎双球菌
病原菌的分离培养/直接涂片
大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性
Flame sterilize wire loop, metal forceps, etc before and after use in a
直接凝集实验 协同凝集实验 乳胶凝集实验 免疫荧光检测 ELISA等
核酸杂交 聚合酶链反应 （PCR） DNA芯片
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凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 中和试验 ELISA等
细菌 病原学 检查法
细菌学 诊断
形态学检查 分离培养,纯培养 生化试验 血清学鉴定 药物敏感试验 毒力实验 动物实验
检测 病原菌成分
第七章
细菌与病毒的微生物学检查法
微生物学教研室 Jiz-Zhao
j12zhao@
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教学大纲
掌握内容
标本的采集和送检原则 病原菌的检验程序 细菌感染的血清学诊断及常用方法
了解内容
病原体的抗原成分、核酸及其他成分的检测方法
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病原学检查的目的
进行病因学诊断 指导合理用药 观察治疗 进行传染病的流行病学调查
HAV Negri body
（二）病毒的分离培养的方法
三 动物接种：动物模型
大
培 鸡胚接种： 9～14d
养
方 法
组织培养
器官培养
组织培养
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养
病毒分离培养及鉴
血凝抑制实验 中和实验 PCR检测
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病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标※
细胞病变（cytopathy) ※ 红细胞吸附 (hemadsorption) 病毒干扰作用 (viral interference) 中和试验 (neutralization test, NT) 空斑形成试验 (plaque formation)
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无菌操作：避免杂菌污染
标本的采集和送检六原则※
采集病变明显部位 不同期不同标本
用抗生素以前
采集双份血清 运送注意保存
第一节 细菌感染的微生物学检查法
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可疑细菌感染
直接形态学 检查
细菌分离培养
采集标本 细菌成分检测
血清学实验 双份血清
特异性抗体检测
鉴定
抗原检测 核酸检测
形态学检查 生化学检查 血清学鉴定 药物敏感实验 动物（毒力）实验
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细胞病变—细胞病变效应※ （CPE）
50%组织细胞感染量 TCID50:
根据有无细胞病变来判断病毒感染性和毒力的指标
细胞病变效应（CPE）
A：未感染病毒的HeLa细胞；B：被柯萨奇病毒B3感染后，细胞变圆、皱缩，细胞折光性减弱；C：被腺病 毒感染后，细胞肿胀，折光性增强，呈葡萄状排列。200