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机能实验设计1


观察指标
血糖测定 取动物尾静脉血用葡萄糖氧化酶法 【注②】,仪器为血糖测试仪及专用试纸
注②:gop-pod法即葡萄糖氧化酶法,可以用来测测 定血清(浆)葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放 过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧 受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性 氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化 合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡 萄糖含量成正比。
预期实验结果
预期结果为CPS能显著改善正常小鼠葡萄糖耐量, CPS对1、2型糖尿病小鼠空腹血糖有显著降低作用。
实验分析与讨论
糖尿病并发症多、致残率高的特点,决定了 其高昂的治疗成本。目前,尚无治愈糖尿病的有 效方法,因此控制患者血糖水平,预防并发症的 发生是治疗糖尿病的关键。由于这是一个长期的 过程,故应用植物中的天然降糖物质与应用合成 药物相比,具有易于接受和坚持及毒副作用小的 优点。现代研究常选择用四氧嘧啶致实验性糖尿 病小鼠(一种特异性β细胞毒剂,可选择性地破 坏胰腺β细胞引起实验性糖尿病),主要表现为 胰岛素缺乏。KKAy小鼠是具遗传倾向的典型2型 糖尿病动物模型,主要表现为胰岛素抵抗。
实验药品及仪器
实验药品: 四氧嘧啶【注①】 实验仪器:血糖测试仪及专用试纸
注①:(2,4,5,6-嘧啶四酮)是嘧啶的一种含氧衍生物。 在水溶液中以水合物形式存在。四氧嘧啶是最早被命名 的有机化合物之一。它最早由意大利化学家Luigi V. Brugnatelli在1818年分离。常用于糖尿病小鼠的造模。
实验设计
1.CPS对正常小鼠口服葡萄糖耐量(OGTT)的影响:正 常小鼠24只,随机平均分成实验组和对照组,空腹12h,一 次性经口给予葡萄糖3g/kg bw,实验组同时一次性经口给予 CPS1g/kg bw,测定给药后0.5h、1h、2h血糖。 2.CPS对随机进食情况下1、2型糖尿病小鼠血糖的影响: 2种糖尿病小鼠各20只,均随机平分成实验组和对照组,实 验组一次性经口给予CPS1g/kg bw,同时撒饲料,测定给药 后2h、4h血糖。 3.CPS对1、2型糖尿病小鼠空腹血糖的影响:2种糖尿病 小鼠各20只,均随机平分成实验组和对照组,实验前动物 禁食4h,实验组一次性经口给予CPS1g/kg bw,分别测定给 药后2h、4h血糖。以上各实验对照组均给予等体积的生理 盐水,其余操作与实验组相同。
苦​ 瓜​ 粗​ 多​ 糖​ 提​ 取​ 物​ 降​ 血​ 糖​ 作​ 用​ 的​ 实​ 验​ 研​ 究
七班第七组 张杰 李江涛 孙宇超 高佳
实验背景
苦瓜,又名凉瓜,为葫芦科苦瓜属植物,果实药食兼 用,具有清热解毒明目、滋补强壮等功效。近年来苦瓜的药 用价值引起了研究者的高度关注。苦瓜含有苦瓜甙(苦瓜果 实中特有的苷类,能够有效的控制血糖。其是β-谷甾醇-βD-葡萄糖甙(β-Sitosterol-β-D-glucoside)和5,25-豆甾二烯醇 -3-葡萄糖甙(5,25-Stigmastadien-3β-ol-β-D-glucoside)的等分 子混合物。)、苦味素(一类具苦味化合物的通称,在中草 药成分中主要指除了生物碱、甙类以外具有苦味性质的物 质。)、苦瓜蛋白等生物活性成分,无论民间或是药理研究 均证明苦瓜具有良好的降血糖作用。
实验目的
本研究观察了苦瓜粗多糖提取物对正 常小鼠糖耐量及实验性糖尿病和遗传性糖 尿病小鼠血糖的调节作用。
实验材料
1.苦瓜粗多糖 取市售新鲜成熟苦瓜,洗净去瓤,粉碎后,按 文献报告提取多糖方法经改进后提取苦瓜多糖,经真空冷冻干 燥得粗多糖样品,经硫酸_苯酚方法(利用多糖在硫酸的作用下 先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成 橙黄色化合物。再以比色法测定。)测定,多糖含量为88%。 实验前用蒸馏水配制成混悬液。 2.昆明种小鼠,雄性,体重18~22g,自由摄食、饮水。所用饲 料为标准鼠饲料,能量密度为15.2kJ/g(能量百分比分别为蛋 白23.1%,脂肪16.%,碳水化合物60.4%)。 3.KKAy小鼠,即遗传性糖尿病动物模型,表现为2型糖尿病特征, 雄性,体重(30〒2)g,血糖筛选标准空腹4h,血糖>8.0mmol/l。
参考文献
1. 侣丽红,赵余庆 《苦瓜的降血糖作用及活性 成分的研究》 中药材,2002,25(6):449-451 2. 林晓明,沈小毅等 《仙人掌、芦荟与苦瓜等降 低糖尿病模型小鼠血糖的效果观察》 卫生研究, 2001,30(4):203-205 3. 袁宝君,戴月 《癫葡萄胶囊调节血糖人体试食 试验的研究》 卫生研究,2003,32(4):326-328 4. Reeves PG Componenls of the AIN-93 diets as improvement in the AIN -76diet J〃Nulr 1997,127:838-841 5. 骆静,王玉坤,王棘 《苦瓜提取物的降血糖作 用》 中药药理与与临床,1999,15(多种降糖成分,除甙类外,还有 生物碱和一种类似胰岛素样的多肽化合物,作用 机理主要有类胰岛素作用、刺激β细胞分泌胰岛 素以及保护胰腺作用。以往研究表明多糖还具有 改善血液的流变性和血小板聚集性,降低全血粘 度,改善全身微循环及组织代谢水平,间接起到 改善胰腺β细胞功能的作用。苦瓜多糖具有抗氧 化、免疫调节作用,可修复受损的胰腺,降低糖 尿病高血糖引起的氧化应激水平。本研究显示对 正常小鼠和2种糖尿病模型都具有显著的降糖作用, 提示苦瓜CPS可能通过多种途径调节血糖代谢,具 体机理有待于进一步深入研究。
实验性糖尿病小鼠模型制备
采用正常昆明小鼠,用pH4.5 0.5mol/l柠檬 酸溶液配制四氧嘧啶,按200mg/kg bw 腹腔注 射,破坏小鼠胰腺β细胞,注射4h后给予10% 葡萄糖溶液灌胃,以避免动物由于持续低血 糖引起惊厥死亡,72h后测量空腹4h的血糖, 血糖>10mmol/l的动物用于实验。模型动物具 备实验性糖尿病特征
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