安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项
一开机
1)打开主机各模块电源（从下至上），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪
器2联机”图标,进入化学工作站，
2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。

3)旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”
选项进入泵编辑画面。

将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min，排出管路中的气体2—3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头），关闭排气阀。

4)重复上述步骤，依此切换到B、C、D溶剂分别排气。

5)将泵的流量设到实验用流速，按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱
20—30分钟。

6)点击四元泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，点击“确定”。

7)把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情
况，进入平衡系统。

二数据采集方法编辑
若已创建方法，可在“方法”菜单选择“调用方法”，选择相应的方法。

若无，需按下面步骤建立：
（1）从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”，钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项，点击确定；
（2）出现“方法信息”对话框，如有需要可将方法的描述信息输入，也可选择不输入任何信息，点击确定；
（3）泵参数设定：在“流量”处输入流量,如1ml/min，在“溶剂 B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。

在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar，以保护柱子。

点击“确定”进入下一参数设定。

（4）柱温箱参数设定：手动输入规定的温度即可。

（5）紫外检测器（VWD）参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。

在“时间表”中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。

点击“确定”，进入下一参数设定。

（6）在“运行时选项表”中选中“数据采集”，点击“确定”。

（7）完整方法编辑完毕。

点击“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名称，点击“确定”。

（8）运行样品：从菜单“视图”中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变…”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。

从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者名称；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。

（区别:手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。

Pr—在前缀/计数器----“前缀”框中输入前缀，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002……）点击“确定”，从“仪器”菜单选择“系统开启”。

三数据处理
1)从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面
2)从“文件”菜单选择“调用信号”选中您的数据文件名，单击“确定”。

3)谱图优化,从“图形”菜单中选择“信号选项”从“范围”中选择“自动量
程”及合适的显示时间单击“确定”,或选择“自定义量程”调整,反复进行直到图的比例合适为止。

4)积分:从“积分”中选择“自动积分”,积分结果不理想,再从菜单中选“积
分事件”，选项选择合适的“斜率灵敏度,峰宽,最小峰面积,最小峰高”.从“积分”菜单中选择“积分”选项则数据被积分.如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。

单击左边图标将积分参数存入方法。

5)打印报告:从“报告”菜单中选择“设定报告”选项进入画面:单击“定量结
果”框中“定量”右侧的黑三角选中“百分比法”面积百分比其它选项不变单击“确定”.从“报告”菜单中选择“打印”则报告结果将打印到屏幕上如想输出到打印机上则单击“报告”底部的“打印”钮。

四关机
1)样品测试完毕后，按照说明书替换色谱柱保存溶液，冲洗至基线平衡。

关机
前用相应的溶剂充分冲洗系统：60%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min；（若使用了无机盐流动体系，则冲洗约30-60min.）或80%乙腈/甲醇-水冲洗大约20min，至然后关泵。

2)退出化学工作站，及其它窗口，关闭主机各模块电源（从上至下），关闭计
算机。

注意事项：
1)第一次使用时，请联系负责人或在熟练人员指导下使用
2)氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。

3)流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的超纯水（易长菌）。

使用前必
须进行过滤（0.22um滤膜抽滤）及脱气处理（可用超声振荡10-15min）。

4)配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，
溶剂不能干涸。

5)使用前仔细阅读色谱柱的说明书，注意适用范围，如pH值范围、压力范围、
温度范围、流动相类型等。

6)样品配制：尽量用流动相配制试样。

必要时使用超声波处理试样，确保试样
完全溶解并混合均匀。

样品必须用0.22um针头过滤器对试样进行过滤（根据试样的性质选择有机相或水相针头过滤器）。

进样针取样前应用试样润洗3次以上，使用后应用流动相清洗3次以上。

7)废液处理：及时清理废液瓶，以防废液溢出。

8)每次使用完毕后，必须将过滤白头浸泡在60%乙腈溶液或100%甲醇中，不能
使用超纯水（易长菌）。

9)流速突然变大或变小会导致柱压的突然改变，时间久了柱子填料会坍陷或松
动，最终柱压下降，所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。

10)每次使用完毕后，应当详细填写使用记录，包括流动相，柱子类型，遇到的
问题、维护方法等。

对实验中仪器的出错，应当详细填写发生情况及处理方法。

未能处理的，应向他人求证，并对下位使用者提出问题所在。

每次使用仪器之前，应当查看使用记录。