附：验证方法
一、试剂盒组成：
验证用细菌内毒素指示剂（1000-4000EU/支）、细菌内毒素检查用水、鲎试剂等和阳性对照用细菌内毒素工作标准品（2-10EU/支）。

二、验证操作规程：
1、任取一支细菌内毒素指示剂用细菌内毒素检查用水1ml溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，然后稀释
P/2λ、P/λ、2P/λ和4P/λ倍（注：P为内毒素标示值，λ为鲎试剂标示灵敏度。

）验证其效价。

当测定值在标示值的50%-200%内，按标示值使用。

例如：选用鲎试剂（0.125EU/ml）来验证内毒素指示剂（标示值4000EU/支）的活性单位。

将内毒素指示剂稀释16000、32000、64000和128000倍，如果反应终点浓度为32000倍，则内毒素测定值：
Pc=稀释倍数×鲎试剂灵敏度=32000×0.125 =4000EU/支。

2、首先用酒精棉球将内毒素指示剂消毒，然后沿安瓿的易折点开启内毒素指示剂，并将其固定在隧道烘
箱或干热烤箱的冷点位置，设备按实际生产运行条件下操作，操作完毕取出内毒素指示剂，放置10-15分钟
冷却至常温备用。

3、将上述内毒素指示剂用1ml的细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，将该溶液稀释
n倍（n=内毒素指示剂标示单位/1000·λ），每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。

例如：选用内毒素指示剂（4000EU/支）和鲎试剂（0.125EU/ml）验证干热除内毒素效果试验时。

按标准规定内毒素活性应降低3个数量级，即内毒素指示剂实测活性单位应低于4EU/支。

该溶液的稀释倍数：n=4000/1000×0.125=32倍。

4、另取细菌内毒素阳性对照品按操作规程制成2λ（λ为鲎试剂的标示灵敏度）的标准溶液做阳性对照。

5、阳性对照：（做2管）
分别取0.1ml浓度为2λ的内毒素稀释液加入2支已经复溶好的鲎试剂管内或原0.1mlTAL安瓿内即可。

做阳
性对照的目的是为了验证鲎试剂标示灵敏度的准确性和内毒素指示剂的生物活性。

6、供试品溶液：（做2管）
分别取0.1ml已经制备好的n倍稀释液加入2支已经复溶好的鲎试剂管内或原0.1mlTAL安
瓿内即可。

供试品溶液的结果用于直接判断隧道烘箱或干热烤箱干热灭菌除热原的有效性。

7、阴性对照：（做2管）
分别取0.1ml细菌内毒素检查用水加入2支已经复溶好的鲎试剂管内或原0.1mlTAL安瓿内即可。

阴性对照的目的是为了判断操作过程有无外源性污染。

8、操作规程参考中国药典附录《细菌内毒素检查法》。

三、结果判断：
保温60分钟±2分钟后观察结果。

若阴性对照溶液的平行管均为阴性，阳性对照溶液的平行管均为阳性，试
验有效。

若供试品溶液的两个平行管都为阴性，判为符合规定；若供试品溶液的两个平行管均为阳性，判供试品不符
合规定。

若供试品溶液的两个平行管中的一管为阳性另一管为阴性，需进行复试。

复试时，供试品溶液需做
4支平行管，若所有平行管均为阴性，判符合规定；否则不符合规定。