实验十 粪便中病原菌的分离鉴定-2
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
头孢噻肟 庆大霉素
30ug >=26 23-25 <=22 10ug >=15 11--14 <=12
（复方磺胺甲恶唑） 注：庆大霉素体外可能敏感，但体内耐药
三、肠道杆菌的生物学性状--大肠埃希菌
凝集，以确定细菌的种类和型别。
+
-
玻片凝集试验
5.致病肠道杆菌药敏试验
将分离鉴定出来的致病肠道杆菌做头孢噻肟、氨苄西林、庆大 霉素、复方新诺明4种药物的敏感试验（K-B法），第3天观察结果测量 抑菌圈直径，以判定细菌对药物的敏感性。
头孢噻肟 庆大霉素
志贺菌K-B法判定标准
药物
浓度 抑菌圈直径(mm)
(葡萄糖蛋白胨水)
IMViC试验结果
细菌类型 吲哚 甲基红 VP 枸橼酸盐利
/试验
用
大肠埃希 ＋
＋
－
－
菌
志贺菌 －/＋ ＋
－
－
动力 + —
沙门菌 －
＋
－
－/＋
+
克雷伯菌 －
－
＋
＋
—
IMViC试验结果
大肠杆菌 + + --
志贺菌/沙门菌 -+ --
变形杆菌 --+ +
4.血清学鉴定——玻片凝集试验 取上红下黄管的菌苔与志贺菌、沙门菌的多价诊断血清做玻片
变形杆菌单糖发酵反应
指示剂： 溴麝香草酚蓝
指示剂： 溴甲酚紫
阴性对照
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖
3.IMViC试验 分组操作，每组将上红下黄、上下全黄双糖铁培养基上的菌苔、
克雷伯菌的纯培养物做IMViC试验，第3天看结果。
I 吲哚试验
(蛋白胨水)
M 甲基红试验
(葡萄糖蛋白胨水)
+-
V V-P试验 C 枸橼酸盐利用试验
+
硫化氢 —
—
—
—
—/+
—
+++
动力
+ — + +
2.观察大肠杆菌、志贺菌、克雷伯菌、变形杆菌5种单糖发酵管的结果
大肠杆菌单糖发酵反应
阴性对照
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖
志贺菌单糖发酵反应
阴性对照
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖
克雷伯菌单糖发酵反应
阴性对照
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖