【实验题目】
细胞膜通透性实验
【实验目得】
1、观察溶血现象并掌握其发生机制。
2、了解细胞膜得渗透性及各类物质进入细胞得速度.
【实验材料与用品】
１、试剂：0、85％ NａＣl溶液、0、0８5% NaCl溶液、0、８moｌ/L甲醇溶液、0、8mol ／L丙三醇溶
液、６％葡萄糖溶液、2% ＴrｉｔｏnX—１0０
2、器具：离心管、试管架、滴管、显微镜、离心机
3、材料：鸡血红细胞
【实验原理】
细胞膜就是细胞与环境进行物质交换得选择性屏障，它就是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞．各种物质出入细胞得方式就是不同得，水就是生物界最普遍得溶剂，通透性高（肾小管、肠上皮、植物根细胞更高),水分子可以从渗透压低得一侧通过细胞膜向渗透压高得一侧扩散，这种现象称为渗透.渗透作用就是细胞膜得主要功能之一。
1.溶血现象
将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内使细胞涨破,血红蛋白释放到介质当中,介质由不透明得细胞悬液变为红色透明得血红蛋白溶液(此时得细胞膜收缩,会略有不溶性内容物),这种现象称为溶血．
红细胞在等渗盐溶液中短时间之内不会发生溶血,但就是由于红细胞得细胞膜对不同物质得通透性不同，时间久了,膜两侧得渗透压平衡会被打破,也会发生溶血.
由于各种溶质透过细胞膜得速度不同,因此发生溶血得时间也不相同.发生溶血现象所需得时间，可以作为测量某种物质进入红细胞速度得指标。
即溶血时间对应着穿膜速度．2.物质穿膜运输得类型
(１）被动运输（不耗能）
被动运输分为简单扩散(顺浓度梯度扩散）与协助扩散。
（通道：载体蛋白、通道蛋白）（2）主动运输(耗能)
需要跨膜载体蛋白得协助,这些载体蛋白起到泵得作用,有选择性地把专一溶质逆浓度梯度得穿膜运输。
3. 影响物质穿膜通透性得因素
（1）脂溶性越大得分子越容易穿膜（非极性得物质比极性得物质更容易溶于脂类物质） （2）小分子比大分子更容易穿膜（小得非极性分子,如Ｏ2 、ＣO 2等)
（3）不带电荷得分子容易穿膜（离子难溶于脂质物质,离子带水膜使体积增大)
（4）亲水性分子与离子得穿膜要依赖于专一性得跨膜蛋白 【实验步骤】 一、大体流程
二、具体操作
1. 取鸡血6ml,加0、８5%N ａＣl 溶液4ml,在1000r ／min 条件下离心5分钟;(RBC 压积量不 少于 0、6ｍol ）
2. 将上述离心后得红细胞按沉淀量配成5０%浓度;（总体积应不少于1、2ｍl)
3. 每组取6支试管，分别加入如下溶液各3ml: （1)０、85％ＮａＣl 溶液 (2）0、085％ＮａＣl 溶液
(3)0、８ｍo ｌ／L(0、3m ｏl/L 等渗)甲醇溶液 (4)0、8mol ／L(0、3ｍol/L 等渗)丙三醇溶液 (5)6%(5%等渗)葡萄糖溶液
（6)2%(1、５%等渗）T ｒi ｔon Ｘ—100
４、 向上述6支试管中分别加入５0%红细胞悬液1滴，轻摇混匀,观察试管中就是否有溶血现象发生 (观察时间１小时),记录溶血时间,并于显微镜下观察各溶液得细胞． 【实验结果与分析】
I 、实验结果
取6只试管分别加入等量得不同溶质
6只试管分别滴加50%红细胞悬液1滴
混匀后,观察并记录溶血时间
在显微镜下观
察细胞形态
配置50%得鸡血红细胞悬液
图１:0、85％NａＣl溶液图２:0、０８5% ＮaCl溶液图３:0、8mol/L甲醇溶液
图4:丙三醇溶液(２0ｍin）图5:丙三醇溶液(４０min）图6:丙三醇溶液（
60min)
图７:葡萄糖溶液图8:Triton X-100
II、观察记录表
编号溶液类型就是否溶血溶血时间现象记录
1 0、85％ NaCｌ
溶液
不溶血／溶液呈暗红色乳浊液，未发生
溶血,作为对照组
2 0、０８5％Ｎa
Ｃl溶液
完全溶血6ｓ溶液呈鲜亮得红色，完全溶
血,作为对照组。
3 0、8mol/L甲醇
溶液
完全溶血35s 溶液呈鲜亮得红色；
完成溶血得时间很短
IＩI、实验分析
１号溶液与鸡血就是等渗得,在短时间内不发生溶血（时间若过长，膜两侧得渗透压平衡会被打破,也会发生溶血)本次实验中控制溶血观察时间在1h内；
2号溶液为低渗溶液，发生完全溶血,因此可将 1号、2号溶液作为对照与另四种溶液进行比对；
3号甲醇溶液中得鸡血红细胞溶血速度很快,在几十秒内就已完全溶血,因甲醇得脂溶性高、分子量小,进入细胞得速度很快，因此在操作过程中要求速度快,在完全溶血前做好装片在显微镜下观察；
４号丙三醇溶液虽然脂溶性较高,但分子量较大，因此进入细胞得速度慢,溶血过程缓慢,在20ｍin左右发现有溶血得细胞(图４)，在40min以后发现有个别细胞在显微镜下得形态有变化(图5、图６)，因丙三醇进入细胞,且其对光得折射率很高,使细胞瞧上去有缺口；
5号葡萄糖溶液,因其分子量过大,进入细胞得速度很慢,在1小时得观察中,未发生明显溶血现象;
6号溶液中添加了表面活性剂,可以将膜蛋白抽提出来，使细胞膜得通透性增大,快速发生溶血现象,同时由于有大量膜蛋白被抽提，细胞结构遭到破坏,若操作速度过慢容易观察不到细胞;膜蛋白溶于溶液中使得溶液得透明度没有2号溶液得高；
经过本次实验可以瞧出,由于溶质得脂溶性、分子量等得差异会导致其进入细胞得速度不同，从而导致溶血时间上得不同，因此可把发生溶血现象得时间当做一种测量物质进入红细胞速度得指标。
【注意事项】
1、滴加完5０%得血细胞悬液后，可用手指轻弹试管，使其混合均匀,防止血细胞沉入底部，但不要用力震荡，以免细胞遭到人为损坏；
2、注意滴加得顺序，因3号溶液再加入血细胞后溶血时间很短,最好在稍后滴加，并做好提前得准备工作。
以免错过溶血得观察;
3、做好小组内分工，丙三醇溶液需每隔1０min观察一次,最好安排同一人进行计时;
4、记录好各个溶液发生溶血得时间;
5、在显微镜下观察时,若发现细胞移动得较快,可用吸水纸吸走部分溶液再进行观察;。