2. 蔗糖浸泡法： （二）石蜡切片：是经典而最常用的
技术。 步骤：共5大步骤： ①取材→ → ②固定→ → ③脱水→ →
第二章一般组织化学技术
④浸蜡、包埋→ → ⑤切片
玻片处理和涂胶：
（三）振动切片： （四）塑料切片： （五）超薄切片：用于电镜组织化
学。 （六）碳蜡切片：
第二章一般组织化学技术
第二章一般组织化学技术
标本制备技术:
组织化学的基本要求： 1. 保持组织细胞良好的形态结构。 2. 具备高度的特异性。 3. 应有一定的灵敏性。 4. 可重复性。 5. 生物反映的产物必须在原位沉淀、
色深、不溶和具有稳定性的特点。
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组织切片技术: （一）冰冻切片：
1. 速冻： 干冰—丙酮（酒精）法： 液氮法：
最适PH值常表现于三个方面： 一是对Vmacr反应速度的影响。
二是对Km或对底物与酶的亲 和性的影响。
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三是对酶稳定性的影响。
确定最适PH的方法：
一是查阅文献，根据前人的经验， 预实验印证（碱性磷酸酶9.2，酸 性磷酸酶5.0）。
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二是实验测定最适PH值。 6. 温度的影响:
第二章一般组织化学技术
（二）显示方法：
PAS反应：过碘酸雪夫（Schiff） 氏法。
反应产物呈紫色沉淀。 在反应中，特别注意PH和温度。
第二章一般组织化学技术
此外HI04还能氧化其它基团： α-氨基醛、酮类、丝氨酸、 α-氨 基醇等。
三、核酸组织化学技术
（一）概述：
第二章一般组织化学技术
（二）显示方法： 1. 福尔根（Feulgen）显示DNA法： 2. 其它方法自学。
二类是显示酶的本质，即酶蛋白的 存在及存在部位—免疫酶组织化学。
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在酶组织化学中，根据其反应原则， 显示酶的方法，可分为两类：
1.沉淀反应法： 主要用于显示分解酶类。
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又分两类： ①金属阳离子沉淀法： S → 生成物中有基团+金属离子结 合→沉淀（有色）。
四、组织化学反应： 五、观察、记录及结果统计分析： 六、查文献写论文：
第二章一般组织化学技术
一般组织化学技术
一、酶组织化学 （一）基本概念及分类特点：
第二章一般组织化学技术
① 酶蛋白是大分子，而一般催化剂 为小分子。
② 酶具有高效的催化能力，其催化 效能比一般催化剂高很多倍。
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处理切片。
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②新碱性品红（NF）： 产物呈红色,不易溶于醇和有机溶剂， 其显色强度高于固红TR 和固蓝BB 。
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（3）葡萄糖氧化酶（尼腺曲霉菌素 源）
常用的显色原有： ① 2-P-碘酚-3-P-硝基苯-5-酚氯化四 氮唑（INT）：产物呈红色，易溶于 有机溶剂。 ② 氮蓝四唑（NBT）：产物呈蓝黑 色。现用于双重染色。 ③四硝基氮蓝第二章四一般唑组织化（学技T术 NBT）：产
产物呈灰褐色，不溶于有机溶剂。 （4）β-半乳糖苷酶（大肠杆菌来源）
5-溴-4-氯-3-吲哚- β-见酶组织化学技术（自学）
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二、糖组织化学技术
（一）概述：一般分四类：
第二章一般组织化学技术
1.多糖： 2. 粘液物质： 3. 糖蛋白： 4. 粘液脂类：
一是温度能影响酶分子结构的稳 定性及其与底物分子之间的亲和性。
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二是温度能影响酶底物复合物分解 速度。
三是温度能影响激动剂或抑制亲 和性。
（三） 显示酶的组化方法及原理
第二章一般组织化学技术
在酶的显示方法中，从原理讲，可 分两大类：
一类是显示酶的活性—酶组织化 学方法：属于一般组化方法。
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（二） 酶的保存及影响酶催化反应 的因素
1.酶浓度的影响：
2.底物浓度的影响：
3.激活剂浓度的影响：
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4. 抑制剂的影响： 根据抑制剂对酶的抑制作用不同：
不可逆性抑制： 可逆性抑制：
竞争性抑制： 非竞争性抑制： 反竞争性抑制：
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5. PH值对反应的影响：
①DAB： H2O2→ H2O +O →+DAB →原位棕黄色沉淀。
②AEC：氧化后玫瑰红色沉淀，易 溶于醇。
③CN： 氧化后蓝色沉淀，易溶于醇 及有机溶剂，且易扩散。
④H-Y试剂：氧化后蓝黑色沉淀。
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（2）小牛肠碱性磷酸酶（CIAP）： 显色原有：
① 固红TR：产物呈鲜红色。 固蓝BB：产物呈亮蓝色。 均易溶于醇和有机溶剂，故及时
（3）结合后的酶分子在液相中能保持
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稳定。
（4）内源性酶的活性应受到最大限度 的降低，使之不能干扰与特异性抗原 相关的染色过程。
（5）酶反应的产物性质稳定，容易被 检测。
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2. 常用酶： （1）辣根过氧化物酶（HRP）：常
用HRP标记抗体。显色原有：
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②偶联偶氮沉淀反应法： S → 生成物中有基团+重氮盐→不 溶的有色沉淀（偶氮染料）。
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2. 电子传递法： 主要显示氧化酶和脱氢酶。
（四）组化中常用的酶类
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1. 标准和要求: （1）酶的纯度较高，容易获得且价格 低廉。
（2）当酶与抗体或抗生物素蛋白结合 后，酶的活性不变。
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组织化学的基本程序
一、选题： 确定研究对象（内容）。 依据前期研究和文献资料。
二、选方法：原则：
应尽量简单， 特异性和灵敏度高， 易得结果， 结果可靠性强。
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三、准备阶段： 1. 试剂、药品: 2. 动物: 3. 实验（模型）: 4. 标本制备（备用）:
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四、蛋白质组织化学
五、荧光组织化学
（一）概述： （二）分类：
③ 酶催化反应条件温和，近中性和常 温下即可发生酶催化反应。
④ 酶对催化的底物具有高度的专一性。 ⑤ 酶分子结构多种多样，其活性受体 内多种因素的调控
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分为六类：
a. 氧化还原酶类： b. 转移酶类： c. 水解酶类：
第二章一般组织化学技术
d. 裂合酶类： e. 异构酶类： f. 合成酶类: