低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的检测
发表时间：2011-06-10T11:12:15.357Z 来源：《中外健康文摘》2011年第11期供稿作者：张艳华[导读] 临床意义 LDL增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。

张艳华（黑龙江省七台河市七煤医疗中心朝阳医院 154600）
【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085 (2011)11-0189-02
【摘要】低密度脂蛋白胆固醇是血清中携带胆固醇的主要颗粒，主要由极低密度脂蛋白胆固醇分解而来，低密度脂蛋白直接向组织和细胞内运输胆固醇，因此LDL增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素，其血清水平越高，发生动脉粥样硬化的危险性越大。

【关键词】低密度脂蛋白胆固醇血清检测
直接测定血清(或血浆)LDL-C的经典方法是超速离心分离 LDL，或超速离心(去除VLDL)结合沉淀法，均非一般实验室所能采用。

电泳分离LDL的方法也不够简单。

十多年来发展起来的简单方法有两类：一类是用化学法分离VLDL，然后测定HDL与 LDL部分的胆固醇，减去HDL-C得LDL-C；另一类是选择沉淀 LDL法。

该法在LDL沉淀后，可测出上清液的HDL+VLDL部分的胆固醇，然后计算出LDL-C，或直接取沉淀物测定LDL-C，这类方法有3种沉淀剂：①肝素-枸橼酸；②聚乙烯硫酸；③多环表面活化阴离子(法国试剂盒，未具体指名化学名称)。

目前多用PVS沉淀法，美国LRC各实验室也统一采用此法(Boehringer试剂盒)。

但国内还很少用LDL-C直接测定，而是用Friedewald公式用TC、 TG、HDL-C 3项测定计算LDL-C，不如直接测定法可靠。

新近，中华医学会检验学会已推荐匀相法作为临床实验室测定LDL-C的常规方法。

1 临床资料
一般资料 48份血脂测定标本为本院的血脂门诊病人标本，早晨空腹采血，室温自行凝固后经离心分离血清，当天完成总胆固醇（TC）、HDL-C和甘油三酯（TG）测定，48份标本的TC平均浓度为5.93±1.37(3.40～9.03)mmol/L，TG的平均浓度为2.04±1.04(0.45～5.88)mmol/L，HDL-C的平均浓度为1.56±0.46(0.68～2.52)mmol/L。

2 聚乙烯硫酸沉淀法
2.1 原理用聚乙烯硫酸(PVS)选择沉淀血清中LDL，测出上清液中的胆固醇代表HDL-C与VLDL-C之和，所以TC减去上清液胆固醇即得LDL-C值。

试剂中含EDTA用以除去两价阳离子，避免VLDL共同沉淀。

适量的中性多聚物(聚乙二醇独甲醚PEG-ME)用以加速沉淀。

胆固醇测定同TC测定。

2.2 试剂
(1)沉淀剂：每100 ml中含PVS钾盐70 mg，EDTA-Na2·2H2O 186 mg及PEGME 16 ml，可在4℃冰箱存放，至少稳定3个月(DEGME 为黏稠液体，要确保加量准确)。

(2)酶试剂：同TC测定。

(3)参考标准：同TC用定值血清。

2.3 操作用早晨空腹血清，如在4℃存放不得超过4天，深低温保存只能冻1次，化冻后即须测定。

在小离心管中加入血清200μl，沉淀剂100μl，混合，室温放置15分钟，离心(3 000转／分钟，15分钟)。

2.4 计算
TC(mmol／L)= ×校准管浓度(mmol／L)
LDL-C(mmol／L) = ×校准管浓度(mmol／L)
LDL-C(mmol／L)=T-C(mmol／L)-非LDL-C(mmol／L)
2.5 临床意义 LDL增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素。

过去只测TC估计LDL-C水平，但TC水平也受HDL-C水平的影响。

故最好采用LDL-C代替TC作为动脉粥样硬化性疾病的危险因素指标。

美国国家胆固醇教育计划成人治疗专业组规定以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。

3 匀相测定法
3.1 原理基本原理有如下几类。

(1)增溶法(SOL法)
①VLDL、CM和HDL由表面活性剂和糖化合物封闭。

②LDL-C+表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

③H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌胺色素。

(2)表面活性剂法(SUR法)
①VLDL、CM和HDL+表面活性剂I+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

H2O2+POD→清除H2O2，无色。

②LDL-C+表面活性剂Ⅱ+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

③H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌亚胺色素。

(3)保护法(PRO)
①LDL+保护剂，保护LDL不被酶反应。

非LDL-C+CEH和COD→H2O2+过氧化氢酶→H2O。

②LDL-C+去保护剂+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

③H2O2+4-AAP+POD+HDAOS→显色。

(4)过氧化氢酶法(CAT法)
①非LDL-C+非离子表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

H2O2+过氧化物酶→H2O2。

②LDL-C+离子型表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+ H2O2。

过氧化氢酶+NaN3→抑制。

③H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌亚胺色素。

(5)紫外法(CAL法)
①LDL+Calixarene→可溶聚合物。

非LDL-C+CE和CO+肼→胆甾烯酮腙。

②LDL-C+去氧胆酸+β-NAD+CEH和CH→胆甾烯酮腙+ β-NADHo
3.2 试剂方法不同，试剂组成亦各不相同，现将增溶法的组成介绍如下。

(1)试剂l：MOPS缓冲液50 mmol／L，pH 6.75；α-环状葡聚糖硫酸盐0.5 mmol／L；硫酸葡聚糖0．5 g／L；MgCl2 2 mmol／L；EMSE 0.3 g／L。

(2)试剂2：MOPS缓冲液50 mmol／L，pH 6.75：POE-POP 4.0 g／L，胆固醇酸酶≥1.0 kU／L；胆固醇氧化酶33.0 kU／L；辣根过氧化物酶≥30 kU／L；4-AAP 2.5 mmol／L。

注：EMSE：N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N-琥珀酰乙胺；POE-POP：聚氧乙酰-聚氧丙酰。

(3)校准物：定值人血清。

3.3 操作自动分析参数
测定方法：二点终点法；反应温度：37℃；波长：600 nm(主)／700 nm(次)。

3.4 参考值 LDL-C水平随年龄上升，中、老年人平均2．7～3.1 mmol／L(105～120 mg/d1)。

(1)我国《血脂异常防治建议》提出的判断标准：理想范围<3．12 mmol／L(120 mg/d1)，边缘升高3．15～3．61 mmol／L(121～139 mg／d1)，升高>3．64 mmol／L(>140 mg／d1)。

(2)NCEP，ATP III提出的医学决定水平：理想水平<2．58 mmol／L(100 mg／d1)，接近理想2．58～3．33 mmol／(100～129 mg／d1)，边缘增高3．64～4．11 mmol／L(130～159 mg／d1)，增高4．13～4．88 mmol／L(160～189 mg／d1)，很高≥4．91 mmo／L(≥190 mg／d1)。

3.5 临床意义同聚乙烯硫酸沉淀法。

4 Friedewald公式计算法
Friedewald原公式按旧单位(mg／d1)计算，假设血清中VLDL-C为血清TG量的1／5(以重量计)，则：LDL-C=TC-HDL-C-TG／5按法定计量单位(mmol／L)计，则应为LDL-C-TC-HDL-C-TG／2．2。

此法有下列缺点：
4.1 公式假设VLDL-C与TG之比固定不变，事实上在高TG血症时，VLDL／TG比例变化较大，其他脂蛋白中TG含量也增多。

4.2 只有TC、TG、HDL-C 3项测定都准确，而且符合标准化要求，才能计算出LDL-C的近似值。

4.3 TG>4．52 mmol/L(400 mg／dl)时，计算结果比实测值明显偏低。

4.4 现在用酶法测TG，往往不减去游离甘油，增加计算误差。

4.5 计算所得LDL-C中包括LP(a)的胆固醇[LP(a)-C]在内。

参考文献
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