"Better Surface Chemistry for Better Separation."色谱柱常见故障与排除1. 柱压问题 2. 峰形异常 3. 保留时间"Better Surface Chemistry for Better Separation."正常的色谱柱柱压升高：1. 色谱柱老化2. 使用了更小填料粒径、更细内径或更长的色谱柱 3. 使用了粘度更高的流动相 4. 多相系统混合梯度会带来更高的柱压。
*选择合适的流速和色谱柱温度，保证色谱柱在正常操作的压力范围之内。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."系统或操作不当引起的柱压升高：1.色谱柱过滤筛板堵塞 2.色谱柱污染 3.保护柱或在线过滤器堵塞*请选择合适的流动相并尽可能除去流动相或被测样品带入的杂质。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."开始洗脱剂中 盐析出 No 断开C压 力还是高 Yes 断开B压 力还是高 Yes NoYes Yes No冲洗后压力还是高No盐洗出 •重新考虑洗脱剂的组分 •下一次进样前冲洗系统检测器管路被堵•清洗检测器 •更换新的管线柱子堵压力低于柱子可 承受的最大压力 Yes YesNo柱子老化 •替换新柱子 •考察柱子是否 是好的柱子堵 替换新柱子 断开A压 力还是高 Yes 是否使用 在线过滤器 Yes 在线过滤器堵了 No 泵管路被堵 No 进样器堵No过滤流动相 和样品•清洗进样阀 •替换新的进样阀 •替换泵里的过滤器 •清洗泵 •替换泵里的管线"Better Surface Chemistry for Better Separation."•清洗在线过滤器 •替换新的在线过滤器色谱柱柱压升高的原因及解决：（1）色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染 解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲 洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后 再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
（2）色谱柱头的填料被样品污染 解决方法：如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污 染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3）色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出 解决方法：如确定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗使柱内盐全部溶解，再换高浓 度甲醇。
（4）流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解 解决方法：如果因pH值使用不当，很难恢复。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."色谱峰峰形异常：1.峰分裂 2.峰前伸、峰拖尾、峰展宽 3.鬼峰 4.倒峰 5.未出峰"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰 裂 分• • • • •柱污染 部分阻塞滤片 柱头塌陷 溶剂效应 检测器气泡"Better Surface Chemistry for Better Separation."裂峰——柱污染Column: C8, 4.6 × 250 mm, 5 µm Mobile Phase:25 mM Na2HPO4 (pH3.0):MeOH=60:40(v/v) Flow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35 ºC Detection: UV 254 nm Sample: Filtered OTC Cold Medication: 1.伪麻黄碱 2.扑热息痛 3. 未知物 4.扑尔敏"Better Surface Chemistry for Better Separation."裂峰——柱塌陷，部分滤片堵塞"Better Surface Chemistry for Better Separation.""Better Surface Chemistry for Better Separation."Column: Polar Phenyl (5 µm, 120 Å, 4.6x250 mm) Mobile phase: CH3OH:0.092%H3PO4(0.04%triethylamine ,0.02% di-n-butylamine )=1.5:98.5 (v/v) Flow rate:1.0 mL/min Detector: 210 nm Column temperature: room temperature Injection volume:20 µLMWD1 A, Sig=210,8 Ref=off (CAY\POLAR-PHENYL-23055-MAHUANG-MIX-2.D) mAU Sample: 麻黄碱、伪麻黄碱对照品40 µ g/mL in CH OH 140 3 120 100 80 60 40 20 0 0 2 4 6 8 10 12 14 MWD1 A, Sig=210,8 Ref=off (CAY\POLAR-PHENYL-23055-MAHUANG-MIX-1.D) mAU Sample: 麻黄碱、伪麻黄碱对照品40 µ g/mL in mobile phase 80 60 40 20 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 min裂峰——溶剂化效应16min溶剂效应引起的峰前伸——用流动相溶解或减小进样量"Better Surface Chemistry for Better Separation."裂峰产生原因的确定• 样品基质复杂或分析多种样品——柱污染或部分 阻塞滤片 • 流动相 pH>=7——由于硅胶溶解导致柱塌陷(除非 使用专门的柱子) • 溶剂比流动相的强度大——可能产生裂峰或宽峰, 由样品量决定 （溶剂化效应）"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰峰峰 拖展前 尾宽伸• • • • • •柱“次级效应” 柱塌陷 柱污染 柱老化 柱负荷超载 柱外效应"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰拖尾——次级效应Si OH硅胶表面残留的硅醇基和硅胶 基质中的的金属杂质对极性溶 质的非特异性吸附造成拖尾O Si OO O Chelation HO HOAl3+Si O O Si O "Better Surface Chemistry for Better Separation ." Si OHCOOH HOOC峰拖尾——次级效应• 用流动相减尾剂(三乙胺)在pH 7 消除峰拖尾 • 降低流动相的pH ,减小与硅醇基作用引起的峰拖尾"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰拖尾——柱污染QC方向QC反方向100%异丙醇冲洗后"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰拖尾/展宽—样品过载效应• • • • • Column: C8，4.6 × 150 mm, 5 µm Mobile Phase:25mM Na2HPO4(pH7.0) : ACN = 40:60 (v/v) Flow Rate: 1.5 mL/min Temperature: 40ºC； Sample: 1.地昔帕明 2.去甲替林 3.多塞平 4.丙米嗪 5.阿米替 6.曲米帕明USP TF High Load / 10 Low Load 1. 1.60 1.70 2. 2.00 1.90 3. 1.56 1.56 4. 2.13 1.70 5. 2.15 1.86 6. 1.25 1.25Plates High Load / 10 Low Load 850 5941 815 7842 2776 6231 2539 8359 2735 10022 5189 10725"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰拖尾——柱外死体积效应"Better Surface Chemistry for Better Separation."峰拖尾原因的确定• 评价柱选择——使用高纯度硅胶柱或不同键合技术柱 • 评价流动相效果——改变流动相pH和添加剂消除次级 效应(流动相中组份与柱子相互作用) • 减小进样量 • 消除柱外效应 • 冲洗柱子——检查柱子老化/塌陷"Better Surface Chemistry for Better Separation."未倒鬼 出峰峰 峰• • • • •系统未进样(漏液、样品不溶解) 样品没有处理好（破坏，衍生化等） 检测器紫外灯不灵敏 进样阀、仪器管路中残余物质 流动相污染"Better Surface Chemistry for Better Separation."鬼峰产生示意图残留样品峰示意图鬼峰与前一次注射样品无关， 当注射空白溶液时，这些鬼 峰就会出现，其保留时间不 同于样品峰的保留时间。
原因：前一次注射后残留的 样品所造成的，注射空白溶 液时，会出现一个与样品峰 类似但是稍微小一些的色谱 峰。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."检测器问题"Better Surface Chemistry for Better Separation."保留时间问题：• • • • • •温度波动 平衡不充分 流动相中有气泡 色谱柱与流动相的匹配不好 流速 仪器系统（漏液或比例阀故障）"Better Surface Chemistry for Better Separation."流动相对保留时间的影响"Better Surface Chemistry for Better Separation."温度变化及柱平衡对保留时间的影响"Better Surface Chemistry for Better Separation."Reversed-phase chromatography columns (反相色谱柱 )保存方法纯乙腈或甲醇保存色谱柱清洗方法1.以乙腈:水（1 : 9,v/v） → 乙腈→ 乙腈:水（1 : 9,v/v） 依次冲洗，然 后进行使用。