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绒毡层的发育是一个复杂而精密的细胞行为，而且是在极短暂时间内接连完成，其中涉及到了大量基因的特异性表达与关闭。已有的研究表明拟南芥转录因子DYT1、TDF1和AMS在调控绒毡层细胞功能分化方面发挥重要的调控作用。上海师范大学植物功能基因实验室杨仲南教授在筛选拟南芥雄性不育突变体的过程中，先后获得了dyt1的等位突变体dyt1-2(at4g21330基因有三个碱基发生突变导致第37位谷氨酸变成精氨酸，第143位谷氨酸变成谷氨酰胺，第148位甘氨酸变成精氨酸)，tdf1突变体（AtMYB35基因第三个外显子上发生一个单碱基的点突变，由CAA突变为终止密码子TAA（583），导致了基因翻译的提前终止）和ams的等位突变体ams-2（在编码AMS基因阅读框的第二个外显子上有两个拷贝的T-DNA反向串联同时插入）。为了分析绒毡层发育相关基因之间的上下游关系，2008年Zhu等对绒毡层形成、发育和功能必不可少的八个调控基因进行分析，假设了一个绒毡层发育的调控网络，在这条调控网络中，DYT1在上游，TDF1居中，而AMS在下游。
步骤：
将野生型和各种突变体的花序用CANOY固定液（95%酒精3份：冰醋酸1份）固定1小时，并进行脱水（100%酒精三次，每次1小时）、置换（环氧丙烷二次，每次2小时）、浸透（Spurr树脂与环氧丙烷的各种比例混合物），最后浸于纯Spurr树脂中2天，60℃聚合12小时。用切片机切成片厚1μm的连续切片，并展平于载玻片上。用0.5%甲苯胺蓝水溶液染色后在普通明视野显微镜观察观察或用1%苯胺蓝水溶液染色后在紫外光激发下用荧光显微镜观察并拍照。
2、对dyt1-2、tdf1和ams-2突变体花药发育第6-8期横切面的观察；
3、转录因子DYT1、TDF1和AMS在调控中层细胞的退化和绒毡层细胞的功能分化中的作用
4、转录因子DYT1、TDF1和AMS在调控花粉母细胞发育中的作用
研究方法、手段及步骤：
研究方法、手段：
本实验通过卡诺固定液将花苞固定，卡诺固定液(Carnoy's Fluid)适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等.有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存. .固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。其后，通过树脂切片技术制得的花药的半薄切片，用1%苯胺蓝或0.5%甲苯胺蓝染色，在普通光学显微镜下观察突变体与野生型的拟南芥的花药形态及其花粉的变化，推测原因。
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上海师范大学本科毕业论文（设计）选题登记表
学生姓名
邹萌
学号
090113421
专业
生物科学（师范）
学院
生命与环境科学学院
指导教师姓名/职称Fra bibliotek高菊芳题目
拟南芥转录因子DYT1、TDF1和AMS突变体药室壁组成的观察
本选题的意义及国内外发展简况：
拟南芥作为高等植物的模式生物，运用化学诱变、辐射诱变、T-DNA插入、转座子插入等一系列诱发突变的方法获得了上千株突变体，为研究双子叶植物的生长发育提供了大量的研究材料。目前已经有超过100个单基因突变株系通过遗传实验技术被克隆定位出来。
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为了详细了解这三个转录因子功能上的差异，本文的研究工作在前人的基础上，对dyt1-2突变体，tdf1突变体和ams的等位突变体ams-2突变体花药发育的第6-8期的细胞学变化进行了比较，为深入分析DYT1、TDF和AMS的功能提供了形态学资料。
研究内容：
1、对dyt1-2、tdf1和ams-2突变体花药发育第6-8期横切面药室壁组成的观察，转录因子DYT1、TDF1和AMS在调控中层细胞退化和绒毡层细胞功能分化中具有不同的功能。
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