一、 色谱流出线
从进样到被测组分流出色谱柱进入检测 器连续测定，得到的检测信号随时间变化 的曲线称为色谱流出曲线或色谱图。
二、色谱术语
1．基线：操作条件稳定 后，无样品通过时检测器 所反映的信号一时间曲线。
它反映检测器系统噪 声随时间变化。稳定的基 线是一条直线。
2．色谱峰：从被测组分开始进入检测器至
分离过程
当流动相中携带的混合物流经固 定相时，其与固定相发生相互作 用。由于混合物中各组分在性质 和结构上的差异，与固定相之间 产生的作用力的大小、强弱不同 ，随着流动相的移动，混合物在 两相间经过反复多次的分配平衡 ，使得各组分被固定相保留的时 间不同，从而按一定次序由固定 相中流出。

第二节 色谱流出曲线和术语
t
' R
tR
tM
死体积Vm：不被保留的组分通过色谱柱所消 耗的流动相的体积，又指色谱柱中未被固定相 所占据的空隙体积（包括色谱仪中的 管路、连 接头的空间、检测器的空间）。
VM tM F0
F0：流动相的体积流速
点保时留所体消积耗VR的：流从动进相样的开体始积到。组分出现浓度极大
VR tR F0
二、色谱法分类
1．按两相分子的聚集状态
流动相
液体 液体
固定相
固体 液体
类型
液-固色谱 液-液色谱
液相色谱
气体 气体
固体 液体
气-固色谱 气-液色谱
气相色谱
2．按固定相的固定方式
柱色谱
填充柱色谱 毛细管柱色谱
平面色谱
纸色谱 薄层色谱 高分子薄膜色谱
3．按分离机制分
➢ 分配色谱：利用分配系数的不同 ➢ 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 ➢ 离子交换色谱：利用离子交换原理 ➢ 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同
VR' i VR' s
4. 色谱峰区域分析 峰高h：色谱峰顶到基线的垂直距离。
区域宽度：
半峰宽W1/2 ：色谱峰高一半处的宽度。 峰底宽W：从色谱峰两侧拐点上的切线与基线交点之
间的距离，也称基线宽度。 标准偏差 ：峰高(h)的0.607倍处色谱峰宽度的一半。
与半峰宽及峰底宽的关系为：
W1/2=2.354 W=4
➢熟练校正因子的计算方法; ➢掌握归一化法、内标法的定量计算方法; ➢掌握外标法，熟练绘制外标法工作曲线
并进行定量计算; ➢掌握填充柱的制备方法。
第一节 色谱及分类
茨维特实验
固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚
色带
一、色谱法
• 色谱法是一种分离分析技术。它是利用各 物质在两相中具有不同的分配系数，当两 相作相对运动时，这些物质在两相中进行 多次反复的分配来达到分离的目的 。
色谱法的特点
➢分离效率高：复杂混合物，有机同系物、异构体。 手性异构体。 ➢灵敏度高：可以检测出μg.g-1(10-6)-ng.g-1(10-9) 级的物质量。 ➢分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成 一个试样的分析。 ➢应用范围广：气相色谱：沸点低于400℃的各种有 机或无机试样的分析。 ➢ 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离 分析。 ➢不足之处：被分离组分的定性较为困难。
K
=Vm/Vs，表示相比率，是柱型特点参数，对 于填充柱，值一般为6~35，对于毛细管柱， 值一般为60~600。
选择性因子： 指相邻两组分调整保留值之比。
tR' 1 tR' 2
VR' 1 VR' 2
值的大小反映了色谱柱对难分离组分对的分离 选择性，值越大，相邻两组分色谱峰相距越远， 色谱柱的分离选择性越高。当等于或接近1时， 说明相邻两组分不能分离。
峰面积（A）：由色谱峰与基线之间所围成的面积 称为峰面积。定量分析的基本依据。
对理想的对称峰：
A=1.065hW1/2
在相同的色谱操作条件下获得的色谱峰 的区域宽度值越小，说明色谱柱的分离 效能越好，柱效越高。
5. 描述分配过程的参数
分配系数K： 组分在固定相和流动相之间的 分配处于平衡状态时，在两相中的浓度之比。
调整保留体积VR'：保留体积与死体积之差，即组分
停留在固定相时所消耗流动相的体积
VR' VR Vm tR' F0
相对保留值is ：一定实验条件下组分i与另一标
准组分S的调整保留时间之比。相对保留值只与柱 温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关， 色谱定性分析的重要参数 。
is
tR' i tR' s
优选第六章魏培海仪器分析色 谱分析法
本章教学内容
➢色谱分离仪的基本原理和基本概念 ➢色谱分离的理论基础 ➢色谱定性和定量分析的方法
本章知识目标
➢熟悉色谱分析中的基本术语; ➢了解色谱分析中的塔板理论和速率理论; ➢熟悉影响色谱柱柱效、分离度的因素; ➢熟悉色谱分析中的定性和定量方法。
本章能力目标
完全流出检测器所形成的峰型部分称色
谱峰。基线与色谱峰组成了一个完整的
色谱图。
色谱峰
3．保留值
保留时间tM：不与固定相作用的物质从进样到出 现峰极大值时的时间。 保留时间tR：试样从进样到出现峰极大值时的时 间。它包括组份随流动相通过柱子的时间 tM和组 份在固定相中滞留的时间。
后调的整保保留留时时间间，tR' 它：是某组组份份在的固保定留相时中间的扣滞除留死时时间间。
K
溶质在固定相中的浓度 溶质在流动相中的浓度
cs cm
K 只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管
特性和所用仪器无关。
分配比k：： 在一定的温度和压力下，组分在 两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相 中的质量比。
k
组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量
ms mm
CsVs CmVm
K Vs Vm
• 色谱法以其具有高分离效能、高检测性能、 分析时间快速而成为现代仪器分析方法中 应用最广泛的一种方法。
基本术语：
固定相——在色谱柱中固定不动的相。可以 是固体，还可以是液体。 流动相——携带试样混合物流过固定相的流 体，是液体或气体。 色谱柱——承载固定相的装置。各种材质和 尺寸。 被分离组分——不再仅局限于有色物质
色谱流出曲线的意义
➢ 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； ➢ 色谱保留值——定性依据； ➢ 色谱峰高或面积——定量依据； ➢ 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； ➢ 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。
第三节 色谱分析基本理论
两组份峰间距足够远： 由各组份在两相间的分配系数决定，