病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O
IgM / IgG 抗体 HIV-1 / -2 / -O
第四代
病毒裂解液 重组抗原合成肽 HIV-1 / -2 / -O anti-p24 Ab
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
－ 0.33 + 11.2
+ 18.1 + 9.17
+ 18.1 + 7.43
0
90
120
150
180
210
240
days after infection
确证试验
－
±
P24
± gp160/p31/p24 /p17
gp160/gp120
+
/gp41/p31/p24 /p17
HIV新发感染队列WB带型规律
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
Anti HIV test generations
reactivity
Depends on the kit
Viral load
4th generation
3rd generation
2nd generation
Ag p 24
IgM AntiHIV
IgG anti HIV
bioMerieux
NucliSens EasyQ HIV-1
v2.0
NASBA技术 分子信标探针
实时
gag
Siemens
Siemens Abbott Lab
Versant HIV-1 RNA 3.0 (bDNA)
Versant HIV-1 RNA 1.0 (kPCR)
RealTime HIV-1 Assay
最低检测限可达20-30拷贝/毫升
HIV Subtypes
Type
HIV-1
Group
M
(Main) (Major)
O
(Outlier)
Subtype
A B C D F G H J K
N
(New) (non-M/non/O)
Subsubtype
A1 A2 B'
F1 F2
A
HIV-2
B
C
D
F
G
Recombinant Virus
HIV-1 Group M: A-
G;Group N,O EDTA ACD/1ml
有些研究，使用RT-PCR技术，探针实时检测，LOWEST 1-2 COPIES/ML
急性期感染者病毒抑制后波动特点
检测下限
慢性期感染者病毒抑制后存在波动
检测 下限
HIV核酸检测在早期诊断HIV感染中的应用
HIV窗口期感染者传染性强
调查时间：2008.12-2015.10 调查对象：MSM， 101例；
WB带型 N
随访频率：感染后1,2,3,4,8,12,24周之后三个月； 无特异性条带
P24 p17
血清对照 HIV-2特异带
避免错误
a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应
加入血清后，针对 不同抗原的HIV特异 性抗体会分别结合 到HIV抗原蛋白带上， 再加入酶结合物以 及底物。结合有特 异抗体的蛋白带会 显色。
快速检测适用于体积较少标本、需要快速提供 实验结果或者在条件受到限制的情况下
区分HIV抗体与p24抗原, 敏感性与三代免疫技术 相似，对抗原的敏感性比四代免疫技术略低。
HIV－1 P24抗原检测
适用范围
HIV-1感染窗口期、HIV抗体不确定或HIV-1阳性母亲 所生婴儿的鉴别诊断。
第四代HIV检测试剂的阳性结果的辅助诊断。 HIV分离培养，病毒复制状况的监测。 结果报告和解释
Circulating Recombinant Forms (CRFs)
CRF01_AE (A/E) CRF02_AG (A/G) CRF03_AB (A/B) CRF04_cpx (A/G/HK) CRF05_DF (D/F) CRF06_cpx (A/G/J/K) CRF07_BC (B'/C) CRF08_BC (B'/C) CRF09_cpx (?) CRF10_CD (C/D) CRF11_cpx (A/E/G/J) CRF12_BF (B/F) CRF13_cpx (A/E/G/J/U) CRF14_BG (B/G) CRF15_01B (01/B') CRF16_A2D (A2/D) CRF17_BF (B/F) CRF18_cpx (A1/F/G/H/K/U)
感染时间 5天以内 6－10天 11－13天 14－19天 20－89天 >90天
HIV Test Spectrum
gp160 gp120
p68 p55 p53 gp41-45 p40 p34 p24
p18
p12
DNA PCR RNA PCR
p24 Ag 3rd gen ELISA 1st gen ELISA Detuned ELISA
----免疫细胞功能检测
质量控制
HIV 抗体 HIV P24抗原 HIV核酸
HIV筛查试验 补充实验
HIV筛查试验敏感性高，牺牲了特异性。 HIV诊断依靠一系列补充实验联合应用提高
准确性。
4个免疫补充实验：HIV-1 Western blot，间接 免疫荧光实验、HIV-1 RNA定性实验和HIV1/HIV-2抗体区别实验。
可及时发现窗口期感染者。 较单份样品核酸检测具有更高的成本效益。
全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）
急性或早期HIV感染后 HIV核酸、抗原和抗体的检测
窗口期
检测限
Fiebig 分级 Ⅰ级 Ⅱ级 Ⅲ级 Ⅳ级 Ⅴ级 Ⅵ级
实验室检测指标 VL 阳性，其他检测阴性 VL 阳性，P24抗原阳性，其他检测阴性 抗体阳性，WB阴性 抗体阳性，WB不能确定 抗体阳性，WB阳性，WB检测没有P31条带 抗体阳性，WB阳性，P31条带阳性
bDNA技术信 号放大 RT-PCR技术 RT-PCR技术
微孔板捕获 比色
Kinetic PCR
双链探针实 时
pol
pol
pol
(integrase) (integrase)
20 to 10,000,000
HIV-1 Group M: A-H;Group O
EDTA ACD/1ml
10 to 10,000,000
1wk
early
recent / established
advanced
2wk 3wk 2mo 6mo 1yr 2yr 3yr
+8yr
急性期病例
有一对MSM与网络上找到的一位MSM发生性行为后约1 周，相继出现急性期感冒症状，发烧，周身肌肉疼痛，乏力， 嗓子疼，持续约3-5天，他们开始怀疑自己是否被网络上找的 性伴传染了HIV,于是在那次高危行为后2周，到我门诊检测。
急性感染阶段各项检测结果随访变化
20
6
lgVL
p24 s/co
5
15
3ELISA s/co
4ELISA s/co
4
s/co lgVL
10
3
2 5
1
感染时间（天） P24抗原
14
+ 3.95
33
+ 3.79
41
+ 1.26
47
+
1.18
55
－ 0.78
0
0
30
60
四代试剂
+ 1.23 + 11.3
三代试剂
全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）
HIV抗体确认实验结果
a
b
c
d
蛋白印迹实验（WB）基本
原理
gp160
gp120
p66 p55
HIV全病毒抗原，经 聚丙烯酰胺凝胶电 泳, 分子量大小不
p51
gp41 p39
建议二次采样
等的HIV抗原蛋白带 被分离开来,然后转 移到硝酸纤维素膜
p31 进行复检及确证实验 上。
急性感染期 HIV阳转后3个月内
无症状期8-10 年
无症状期
AIDS期 10-19 个月
AIDS期
数学模型和前瞻性队列研究发现，急性感染期HIV传播的风险性是无症状期的26-43倍
集合核酸定性检测 （Pooling PCR）
多样品集合对采供血机构血浆以及HIV抗体阴性的
高危人群进行集合核酸检测，及时发现窗口期感染， 降低“残余危险度”，减少二代传播。
HIV临床检测研究
卫生部艾滋病免疫学重点实验室 姜拥军
Ag
Ag
CD4+T
HIV抗体检测 HIV P24检测 HIV 核酸检测
病毒储存库检测
CD4+T细胞检测 HIV 耐药检测
一．感染后机体反应----HIV 抗体检测 二．病原体抗原---------HIV P24检测 三．病原体核酸---------HIV RNA检测 四．免疫状态---------CD4+T细胞检测 五．治疗后病原体耐药---HIV耐药检测 六．功能性治愈------病毒储存库检测
HIV-1 P24抗原筛选试验有反应的标本必须经过中和试验 确证以后才能判断阳性或阴性。 HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能 依此确诊。
HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能 排除HIV感染。
HIV核酸定性定量检测