（二）分离培养

2.荧光染色法（金胺O法） （1）染色剂：金胺0.01g溶于95％乙醇 10ml内，加5 ％ 石炭酸至100ml。 脱色剂：3 ％ 盐酸乙醇。 复染剂：0.5 ％ 高锰酸钾水溶液。 （2）染色步骤：痰涂片火焰固定，加染色剂， 10~15分钟水洗。脱色剂脱色3~5分钟，至无黄 色，水洗。复染剂染2分钟，水洗，干后用荧光显 微镜镜检。 （3）结果：结核分枝杆菌呈金黄色荧光。如下图。
（二）集菌涂片法
取深咳痰10ml于消毒处理过的广口瓶中，加5倍 量的无菌蒸馏水，经121℃高压蒸汽灭菌20min， 待用。 离心集菌法：取上述痰液10ml放入50ml离心管内 加蒸馏水至50ml， 3000r/min离心30min，取沉 淀物涂片。 漂浮集菌法：取上述痰液10ml放入100ml细口玻 璃容器内，加蒸馏水30ml，加入二甲苯0.3ml， 振荡10min，加蒸馏水至满，静置15min，取载 玻片盖于瓶口，静置15min，取下玻片，干后染 色。 目前我们实验室采用BaSO溶痰剂与痰检体2：1 或3：1混合均匀，静置10~20min，待其完全溶 化，离心取沉淀涂片染色。简化了操作过程。
控制结核 人人有责

3月24日是第13个“世界防治结核病日”， 今年卫生部的宣传主题是“控制结核、人 人有责”。疾病预防控制中心提出，目前 结核病仍然是严重危害人类健康的主要传 染病之一，75%的病人为中青年，每年死 亡13万人。
结核分枝杆菌检测及 相关内容
张东华
一、结核名称的由来
结核病是一种古老的疾病，也许有了人类 不久就已有了它的存在。1973年，湖南长 沙马王堆汉墓出土的2100年前的女尸身上 发现左上肺门均有结核病灶。1965年，法 国学者Sylvius根据解剖了死于所谓“消耗 病”或“痨病”人的尸体，发现肺脏及其 它器官有颗粒状的病变，根据其形态特征 称之为“结核”。因而，结核的名称就此 而被应用至今。



（三）染色方法
1.抗酸染色 第一液：碱性复红乙醇溶液 10ml 5％石炭酸溶液 90ml 第二液：浓盐酸 3ml 95 ％乙醇 97ml 第三液：美蓝乙醇饱和溶液 100 ml 10 ％KOH 0.1ml 蒸馏水 100ml 染色步骤：⑴涂片经火焰固定后加第一液约5min，水洗。⑵第二液脱 色，至涂片无红色脱出为止，水洗。⑶第三液复染约30s，水洗，自然 干燥后镜检。 结果：抗酸杆菌呈红色，背景为蓝色。 报告方式；﹙﹚未发现抗酸菌/300个油镜视野 (±)1～ 2个抗酸菌/300个油镜视野 (1+) 3～9个抗酸菌/100个油镜视野 (2+) 10～99个抗酸菌/100个油镜视野 (3+) 1～10个抗酸菌/每个油镜视野 (4+) ＞10个抗酸菌/每个油镜视野
2.尿液 留取12小时尿液，静置，倾去上清，留取沉淀部 分30ml，以3000r/min离心30min，弃上清，取沉 淀物涂片. 3.脑脊液 无菌收集脑脊液，放置24小时后，取网膜状蛋白 质涂片，或以3000r/min离心30min，取沉淀物涂 片。 4.胸腹水与尿液同。 5.胃液标本 将标本置冰箱内20分钟，取浓厚部分进行涂片。 6.病灶组织：先用组织磨碎器磨碎后，同痰标本涂 法。
PCR 技术
DNA 探针
染色
荧光染色
观察生长情况 抗酸染色 鉴定试验 耐药试验 报告群别或种别
报告分枝杆菌
报 告 群 别 或 种 别
（一）标本的收集及直接涂片法
1.痰标本 最好为清晨第一口痰，洁净水或冷开水漱口后， 用力咳嗽以获得2-3ml痰液置于标本盒内，直接涂 2.0cm×2.5cm的卵圆形痰膜，自然干燥后抗酸染 色镜检即可。涂片应使用干净无划痕的新玻片。 痰标本不能使用蜡盒，因为其可导致涂片结果假 阳性。
二、结核病
结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染 病，可以侵及很多脏器，以肺部受累形成 肺结核〔pulmonary tuberculosis〕最为常 见；其次有肠结核、淋巴结结核、泌尿系 结核、骨结核、结核性脑膜炎、全身粟粒 性结核、结核性腹膜炎等。
三、我国结核病疫情现状
据2000年全国结核病流行病学抽样调查结果显示，我国 结核病疫情现状为： （1）结核病感染率高：目前全年龄组结核菌感染率为 44.5%，全国约5.5亿人受到了结核菌感染，结核菌感染 率高于全球人口感染率为1/3的水平。 （2）结核病患病率高：全国活动性肺结核患病率为 367/10万，涂阳肺结核患病率为122/10万，菌阳肺结核 患病率为160/10万；估算全国现有活动性肺结核病人数 450万，其中涂阳肺结核病人150万，菌阳肺结核病人 200万。 （3）结核病耐药率高：肺结核病人结核菌初始耐药率为 18.6/10万, 继发耐药率为46.5/10万。按照全国菌阳肺结 核病人200万计算，全国有耐药病人55.5万。 （4）结核病死亡率高：全国结核病死亡专率为9.8/10万, 每年因结核病死亡13万人，为各种其他传染病和寄生虫 病死亡总和的2倍。
五、结核分枝杆菌检测方法
（一）涂片检查 （二）分离培养 （三）动物试验 （四）基因诊断
结核分枝杆菌检验程序
标本
涂片 动物试验 分离培养 基因诊断
直接涂片
集菌涂片 再接种豚鼠 或小白鼠 观察脏器病变涂 抗酸染色 片染色或培接种液体培养基 （Bactec 系统） 接种固体培 养基4~8周
四、肺结核的主要症状
肺结核是由结核杆菌引起的一种慢性肺部感染性疾病。 病初有轻微咳嗽或咯痰，或有四肢结节性红斑。部分病人 表现为胸痛、咯血。常见的全身症状有周身不适，精神萎 靡，易倦乏力，性情烦躁，心悸，食欲减退，体重减轻， 盗汗，不规则低热，两颧潮红，妇女月经不调。也有无明 显症状，仅在胸部X线健康检查时才被发现。在慢性病程中， 病情恶化，可有高热畏寒，紫绀气促，肺萎缩，肺气肿， 渗出性胸膜炎，胸膜增厚等。本病的病因与结核杆菌感染 因素有关 。本病主要诊断依据结合局部和全身症状。痰液 检查找到结核杆菌可确诊 。