生存没有影响。 ➢ 具有多种限制核酸内切酶切点，以便与目的基因连接。 ➢ 具有某些标记基因，便于进行检测和筛选。
常用的载体： 质粒 、λ噬菌体、动植物病毒
基因工程的诞生
1972年，美国斯坦福大学的科学家得到 了猿猴病毒SV40DNA和噬菌体DNA连接 物，这是第一个人工DNA重组产物。
1973年，斯坦福大学的科学家进一步实 现了细菌之间的性状转移，这是基于工 程发展史上第一个成功的基因克隆实验， 标志着基因工程的诞生。
生物B基因片段
……GAATTC…… ……CTTAAG……
EcoRⅠ酶切
……G AATTC…… ……CTTAATAA G……
……GAATTC…… ……CTTAAG……
不同来源的DNA片段混合
……GAATTC…… ……CTTAAG……
将不同种来源的DNA片段连接起来
DNA酶
断裂磷酸二酯 键，将DNA水解成 单个脱氧核苷酸。
对象
两个DNA片段
单个核苷酸 加到已有的核
限制性核酸内切酶
酸片段上
断裂磷酸二酯
键，将DNA切割成
模板 无
以一条DNA链 片段。
为模板
3、（运）载体—“基因的运输工具”
作用：①与目的基因相连接； ②将目的基因导入受体细胞
作为运载体的必备条件： ➢ 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存,而对宿主细胞的
资料
苏云金芽孢杆菌 毒蛋白
棉铃虫中毒死亡
棉铃虫
理论基础一：DNA是遗传物质
a、肺炎双球菌转化实验 b、噬菌体侵染细菌实验
三个实验图片
理论基础二：DNA的双螺旋结构
1953年，沃森和克 里克发现了DNA双螺旋 的结构，开启了分子生 物学时代，使遗传的研 究深入到分子层次。
生物A基因片段
……GAATTC…… ……CTTAAG……
（2）切割完成后，采用 DNA连接酶 酶将运载体 与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称 为 重组DNA分子。
3、（运）载体—“基因的运输工具” 质粒
①存在：细菌和酵母菌细胞 质中的小型环状DNA分子
②本质： ③特点：
限制性核酸内切酶的种类
EcoR.I 限制性核酸内切酶
粘性末端
粘性末端
可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，
即恢复被限制性核酸内切酶切开的两个DNA片段之间的 磷酸二酯键
2、DNA连接酶—“基因的针线”
作用:把两个DNA片段的粘性末端缝合起来。 形成的键：脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键。
P
AT
P
CG
P
P
GC
P
P
TA
思考：DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？
形成磷酸二酯键
【习题】 农业科技工作者在烟草中找到了一抗
病基因，现在采用基因工程技术将该基因转入棉
花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题：
（1）要使运载体与该抗病基因连接，首先应使用
限_制__性__内__切__酶_进行切割。假如运载体被切割后，得
到的分子末端序列为
，则能与该运载体
连接的抗病基因分子末端是（ A ）
基因工程
在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和 “拼接”，从而对生物的基因进行改造和重新组合，然 后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产 生出人类所需要的基因产物。
核 心: 构建重组DNA分子 操作水平: 分子水平 技术原理: 基因重组 技术优点: 定向改造 工 具: 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体