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原花青素的含量正丁醇测定方法

原花青素含量
1.材料和仪器
主要试剂:提取液,原花青素标样,盐酸正丁醇溶液、NH4Fe(SO4)2、95% 乙醇。

主要仪器:UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。

溶液配制: 2%NH4Fe(SO4)2 称取3.66g七水合硫酸亚铁固体,溶于100ml水中后即得
95%乙醇移取5ml的蒸馏水至100ml容量瓶中用无水乙醇定容
盐酸正丁醇移5ml浓HCL 至100ml容量瓶正丁醇定容
2.实验步骤
a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.010g,用95% 乙醇溶
解并定容于10mL 容量瓶中,所得浓度为1mg/mL 作标样。

吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL分别于25mL 具塞试管中,加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇(5:95)溶液,盖塞,摇匀,于微沸的水浴中加热反应40min 取出,于冷水中迅速冷却,溶液显红色,以0mL 溶液作为空白对照,于546nm 处测定其吸光度。

采用最小二乘法作原花青素浓度(C)与吸光度( A ) 线性回归方程。

结果见表
取得标样体
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 积(/ml)
对应标样浓
度(mg/ml)
测的吸光度
值A
b.样品测定
分别精确吸取10mL 样品,用95%乙醇定容于50mL 容量瓶。

吸取上述样品待测液3mL 于25mL 具塞试管中,按标准曲线制作项下的操作步骤,依次分别加入0.2mL 2%NH4Fe(SO4)2 溶液、6mL 盐酸正丁醇溶液。

根据标准曲线计算出结果,按其稀释倍数求得各样品中原花青素含量。

3.单因素实验
1 .料液比: 1:6 1;7 1:8 1:9
温度室温超声波时间10min 乙醇浓度 95%
2. 超声波时间: 10min 20min 30min 40min
温度室温料液比:1:8 乙醇浓度 95%
3.乙醇浓度 35% 55% 75% 95%
温度室温料液比:1:8 超声波时间30min
4.正交试验
1 2 3
A A A
A B B
A C C
B A B
B B C
B C A
C A C
C B A
C C B
1为单因素中第1项(以此类推2...)
A为单因素中第1项第2类 B为第3类(如3 C 指乙醇浓度95%) A B C 为单因素测定中最优3选项。

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