显微镜直接计数
（统计菌株数目）
优点： 计数方便，操作简单 缺点： 死菌、活菌都计算在内，
统计结果比实际值偏大
1 、产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ C ） A 一个细菌、液体培养基 B 许多细菌、液体培养基 C 一个细菌、固体培养基 D 许多细菌、固体培养基
2、某同学在稀释倍数为106 的培养基上测得平板上的菌落数 的平均值为215，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用 稀释液的体积为0.1ml） B 8 9 A 2.15×10 B 2.15×10 C 215 D 21.5
方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。 方案2：A同学以不接种的培养基作为空白对照。
2、增加实验说服力的措施：
排除偶然因素对实验结果的影响。 ①设置重复：
方法： 在培养过程中同一稀释度下应涂布 至少3个平板，才能增强说服力和准确性
排除实验组中非测试因素对实验结果 ②设置对照：
的影响，提高实验结果的可信度。 方法：如空白对照组 观察培养物中是否有杂菌污染 若对照的培养皿中无菌落生长，说明：
2、操作流程：
（1）土壤取样 土壤“微生物的天然培养基”，含有大量 取样原因： 的微生物，数量最大，种类最多。 土壤要求： 富含有机质，pH接近中性且潮湿。 取样部位： 距地表约3∼8cm土壤层
（2）样品稀释
稀释原因： 样品的稀释程度直接影响平板上生长 的菌落数目 稀释标准： 选用一定稀释范围的样品液进行培养， 保证获得菌落数在30-300之间，便于计数。 稀释倍数： 测细菌数： 一般用104、105、106稀释液
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接 种环通过 灭菌，在第二次及以后的划线时， 总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的 是 。 (3)示意图A和B中, 表示的是用稀释涂布平 板法接种培养后得到的结果。
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部 分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现:振 荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因 是：振荡培养能提高培养液中 的含量，同时可 使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。
3、下列有关检测土壤中细菌总数实验操作的叙述中， 不正确的是（D ） A 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨，高温、高压灭菌后道平板 B 取104、105、106 倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板 C 将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24h-48h D 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数。
用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中 的细菌数，在对应稀释倍数为 106 的培养基中，得 到以下几种统计结果，正确的是( ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B ．涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和 260，取平均值238 C ．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21 、 212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 210、 240和250，取平均值233
一、筛选菌株 （纯且活的菌种）
1、自然界中目的菌株的刷选原理：
在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去找。
2、实验室中筛选微生物的原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
KH2PO4
NaHPO4 MgSO4 H2O 葡萄糖 尿素
测放线菌： 一般用103、104、105稀释液 测真菌数： 一般用102、103、104稀释液
思考：为什么分离不同的微生物要用不同的稀释度？ 土壤中各类微生物的数量不同 如果是第一次做这个实验，稀释倍数的范围 可以放宽103-107.
1 、关于土壤取样的叙述，错误的是（ C ） A 土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B 先铲去表层土3-8cm左右，再取样 C 取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D 应在火焰旁称取土壤 2、下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离”实验步骤排列 正确的是 C ①土壤取样 ②称取10g土壤加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1ml进行平板涂布 ④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107 稀释度 A①②③④ B①③②④ C①②④③ D①④②③
3、方法： 利用选择培养基分离
选择培养基： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。 利用选择培养基分离微生物的方法： (1)在培养基中加入某种化学物质。 例如，加入青霉素可以分离出 酵母菌和霉菌 ； 加入高浓度的食盐可以得到 金黄色葡萄球菌 。 这里的加入是在培养成分的基础上加入。
酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基 碱性增强→ 酚红变红
Байду номын сангаас
为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流 水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下 列问题： (1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在 涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了 一段时间，这样做的目的是 ； 然后，将水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接 入稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为 39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数 为 。
(2)改变培养基中的营养成分。
例如，缺乏氮源时可以分离 固氮微生物 ； 尿素作为唯一氮源时，可以分离出 能分解尿素的细菌 石油作为唯一碳源时，可以分离出 能消除石油污染的微生物
(3)改变微生物的培养条件。 例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到 耐高温的微生物
本课题使用的培养基的配方如下： KH2PO Na2HPO MgSO4 成分 葡萄糖 尿素 · 7H O 2 4 4
含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 10.0 g 琼脂 水
1.0 g 15.0 g 1000 mL
请分析后回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和 葡萄糖 和________ 尿素 。 氮源的分别是________ 固体 (2)该培养基为____________ 培养基(按物理状态分)， 有凝固剂琼脂 。 理由是______________ (3)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如 果具有，又是如何进行选择的？ ______________________________________ 有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能 够利用尿素的微生物才能够生长
______________________________________。
二、统计菌落数目
1、方法：常用稀释涂布平板法统计活菌的数目
稀释度足够高 当样品的 时，培养基表面生长 原理： 的一个菌落来源于样品稀释液中的 一个活菌 。 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品 中大约含有多少的活菌。
（三）微生物的培养与观察 1、接种：用适当的稀释液涂布平板 2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d; 放线菌:25∼28℃, 5∼7d; 霉菌: 25∼28℃, 3∼4d. 3、观察：a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为观察对象
（四）鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生物的生存
缺点： 操作复杂，实验结果有一定的误差。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低
因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上
观察到的只是一个菌落。 因此统计结果一般用菌落数表示。 计算 每克样品中的菌株数=（C/V)X M
公式： C:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；
V:所用稀释液的体积； M:稀释倍数。
=（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数 。
培养基未被杂菌感染
若实验的培养基菌落数偏高或者菌落形态多样，说明： 培养基混入其他杂菌
如完全培养基对照组 观察选择培养物是否具有 选择作用 若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数大于选择培养基 上的数目，说明： 选择培养基具有筛选作用
三、实验设计
1、实验流程：
配制土壤溶 液 系列稀释 涂布平板与 培养 菌落计数
利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中， 从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别 得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入 了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能 在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿 不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证 据。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在 要求： 30∼300 个菌落的平板 统计
例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤 样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中， 得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌 落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板， 统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个 平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值
1.4g
2.1g 0.2g 10.0g 1.0g
该培养基的配方中，为微 生物的生长提供碳源和氮源的 分别是什么物质？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
琼脂
15.0g
将上述物质溶解后， 用蒸馏水定容到 1000mL。
此配方能否筛选出分解尿 素的细菌？为什么？
能。只有产生脲酶的细菌 能利用尿素作为氮源而生 存。
思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶， 这种酶要能忍受93 ℃左右的高温。如果请你来寻找 这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？( C)
A．土壤中
C．热泉中 如何寻找耐高温的酶？
B．海水中
D．冷库中 —寻找高温环境；
原理：热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数 的微生物，使得耐热的Taq细菌脱颖而出。选出 耐高温细菌后，从耐高温菌种中提取耐高温酶。