《生理药理学》实验指导课程编号：0741535048实验一水杨酸钠血浆半衰期的测定一、实验目的 了解分光光度法测定水杨酸钠的血药浓度和计算半衰期的方法。

二、实验内容家兔静脉采血、静脉注射、离心、光电比色等。

三、实验要求集中授课形式。

四、实验准备预习药物代谢动力学，药动学参数的概念、意义、计算方法等理论知识。

五、实验原理、方法和手段在酸性条件下，水杨酸钠解离为水杨酸，后者与三氯化铁生成一种紫色络合物，该络合物在520nm波长处，其光密度与水杨酸的浓度成正比。

采用光电比色法，计算血药浓度，进一步计算药物的半衰期。

六、实验条件1. 动物家兔，2～3kg，雌雄均可。

2. 药品10% 及0.02% 水杨酸钠（sodium salicylic），10% 三氯化铁，10% 三氯醋酸（trichloroacetic acid），0.5% 肝素（heparin），蒸馏水。

3. 器材试管架、试管、离心管、吸管（10mL、2mL、1mL 0.5mL）、注射器（2mL、5mL）、针头、吸耳球、分光光度计、离心机、计算器等。

七、实验步骤1、取4支离心试管，编号后各加入10% 三氯醋酸5mL。

2、取家兔一只，称体重，使其耳部充血后，用经0.5% 肝素湿润过的注射器由耳缘静脉缓慢抽血2.5mL，分别置于1号管和2号管内各1 mL，余血弃掉，将试管摇匀静置。

3、由耳缘静脉缓慢注射10% 水杨酸钠1.5 mL/kg，（150mg/kg），给药后5min 和35min，各采血1mL，分别置于3号管和4号管内，摇匀静置。

4、1，3，4号管内各加入蒸馏水1mL ，2号管内加入0.02%水杨酸钠1mL。

摇匀。

5、将4支离心管置于离心机内，以1500～3000rpm，离心5min，使血浆蛋白沉淀。

6、另取相应编号的试管4支，将离心后的上清液倒入相应编号的试管中，从中准确吸取3mL 分别置入相应编号的另外4支试管中，每管再加入10% 三氯化铁溶液0.5mL，摇匀显色。

7、以1号管为对照管，用724分光光度计在波长520nm处测定其余3管的光密度值，由2号管的光密度值（Y2）和浓度（X2）求比值K，即K=X/Y（恒定）。

再根据X=KY，由Y3和Y4求得X3和X4，即药后5min 和35min 时的血药浓度，根据下列公式求出半衰期（t1/2）。

0.301t1/2 =（lgX3-lgX4）/△t注：式中X3和X4分别为给药后5min 和35min 时的血药浓度，△t 为两次取血的间隔时间（30 min）。

结果与处理：将实验结果列入表3中，根据实验结果计算半衰期。

表3 水杨酸钠血药浓度测定步骤与结果记录试管（编号）10%三氯醋酸/mL血/mL 蒸馏水/mL0.02%水杨酸钠/mL10%三氯化铁/mL光密度(Y)K值(X/Y)C/μg·mL-11（对照） 5.0 1.0 1.0 - 0.52（标准） 5.0 1.0 - 1.0 0.53（药后） 5.0 1.0 1.0 - 0.54（药后） 5.0 1.0 1.0 - 0.5八、思考题1、测定药物的t1/2有何临床意义？2、什么情况下药物的t1/2会延长？九、实验报告1、预习报告要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法、实验注意事项等。

2、实验记录所测各管的光密度值。

3、实验报告写明实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法等。

重点是对数据的处理，结合思考题分析实验结果。

十、注意事项1、本实验属分析性的，操作必须准确，取血间隔的时间△t要根据各实验者操作的准确时间而定。

2、取血时可采用多种取血方式，如心脏取血、动物取血等，取血用的注射器在取血前要用0.5%肝素润洗，以防血凝。

实验二药物对离体肠管平滑肌的作用一、实验目的1. 学习离体平滑肌器官的实验方法。

2. 观察乙酰胆碱、阿托品、组织胺、扑尔敏和某药等药物对离体回肠平滑肌的作用，并分析其作用原理。

二、实验内容熟悉离体器官实验的方法，观察肠平滑肌收缩曲线的记录方法。

多种药物对离体肠管活动的影响。

三、实验要求集中授课形式。

四、实验准备传出神经系统药物的分类、药理作用、作用机制，肠平滑肌省分布的受体、兴奋后产生的效应。

五、实验原理、方法和手段消化道平滑肌除具有肌肉的共性外，尚具有不同于心肌和骨骼肌的特性，主要表现在其自动节律性缓慢而不规则，伸展性较大，兴奋性较低，具有一定的紧张性，对电刺激和切割不敏感，而对温度变化、牵拉、酸碱、乙酰胆碱等理化因素敏感等。

本实验观察M胆碱受体激动药和阻断药、组胺受体激动药和阻断药以及某药对小肠平滑肌的作用，并理解和分析药物的作用机制。

六、实验条件1. 动物：家兔，2～3kg，雌雄均可。

2. 器材：BL-420F生物信号采集处理系统、计算机、打印机、恒温循环水浴各1台，麦氏浴管、张力换能器、气袋、通气钩、铁支架、止水夹各1个，1ml注射器5个，培养皿、250ml烧杯、100ml烧杯、搪瓷盘、塑料碗各1个，十字夹1套，普通剪刀、组织剪、眼科剪、止血钳各1把，丝线、打印纸若干。

3. 药品：台氏液、0.1%氯化乙酰胆碱溶液、0.05%硫酸阿托品溶液、1%磷酸组织胺溶液、0.1%扑尔敏溶液、1%某药溶液。

七、实验步骤1. 标本制备：取家兔一只，置于手中倒悬，以木槌击头至死，立即打开腹腔，找到回盲部，在离其2～3cm的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3 cm的小段备用。

2. 冲洗浴管，并在其中加入台氏液30ml （标线处），打开恒温水浴，设定温度为37.5℃，并打开循环开关。

3. 取上述备用回肠一段，两端用丝线结扎并用挂钩挂住，一端挂在通气钩上，放入浴槽，另一端连于张力换能器。

通气钩另一端与气袋相连，缓慢通入气泡，并调节1～2个气泡/秒。

4. 打开计算机，进入BL-420F生物信号采集系统，选择“通道1 → 张力”，实验项目下的“药理实验”，“药物对离体肠平滑肌的作用”。

调整肠管的张力，使之适度。

5. 观察项目：待肠管在浴管内稳定10 min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次向浴槽中滴加药液。

每加一个药后立即标记，并观察、记录肠管的收缩幅度。

待药物的作用明显及肠管的活动平稳后加入下一个药物。

第一组药物：（1）0.1%氯化乙酰胆碱溶液0.2ml；（2）0.1%硫酸阿托品溶液0.2ml；（3）重复给（1）。

用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第二组药物。

第二组药物：（4）1%磷酸组织胺溶液0.3ml，作用明显时加入（5）；（5）0.1%扑尔敏溶液0.3ml；（6）重复给（4）。

用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第三组药物。

第三组药物：（7）1%某药溶液1ml；（8）0.1%硫酸阿托品溶液0.2ml；（9）重复给（7）。

用台氏液冲洗1～2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第四组药物。

第四组药物：（10）1%某药溶液1ml；（11）0.1%扑尔敏溶液0.2ml；（12）重复给（10）。

6. 切断电源，取出回肠，冲洗浴槽，整理实验台其他物品。

八、思考题1. 乙酰胆碱和阿托品对小肠平滑肌的作用及其作用机制？2. 组胺和扑尔敏对小肠平滑肌的作用及其作用机制？3. 阿托品和扑尔敏对某药的作用有什么影响？为什么？九、实验报告1、预习报告要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理方法、实验注意事项等。

2、实验记录3、实验报告整理实验结果，剪接描记曲线并打印。

结合思考题对实验结果进行分析。

十、注意事项1. 冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管；标本制备好后，放在盛有台氏液的培养皿中保存，以免影响标本的反应性。

肠管两端穿线时，切勿将肠管缝死，只需穿过一层肠壁。

2. 实验前后应将浴槽彻底清洗，以免残留药物影响实验结果。

3. 台氏液必须新鲜配置，温度保持在37℃～38℃。

4. 通气时使气泡呈小米粒大小均匀上升，水泡不宜过大。

5. 调节连线松紧度，并且线应垂直桌面。

6. 加药时不要把药液直接加到回肠上，以免影响结果。

7. 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。

实验三热板法观察药物的镇痛作用一、实验目的 用热板法观察某药的镇痛作用，并学习镇痛药物的筛选方法。

二、实验内容小鼠捉拿、固定、分组及腹腔着注射方法，热板测痛仪的使用。

三、实验要求 集中授课形式。

四、实验准备 镇痛药的作用、作用机制、临床应用、不良反应及使用注意。

五、实验原理、方法和手段将小鼠置于恒温的热金属板上，热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后足），记录小鼠从放于热板上至出现疼痛反应即舔后足的时间（痛阈值），比较用药组与对照组小鼠痛阈值的差异，判定药物有无镇痛作用。

六、实验条件1 动物 小鼠（18～22g ），雌性。

2 药品 某药，生理盐水，某药。

3 器材 热板测痛仪，天平，注射器（1ml 2支），大镊子。

七、实验步骤1 调整仪器 ①接通电源，按动“升温”按钮，将温度设定为55℃。

②测痛记时：按动“T ”按钮，计时开始，再次按动“T ”按钮，计时停止，并锁定数据。

再次按动“T ”按钮又从零开始计时，周而复始。

2 小鼠筛选及正常痛阈值的测定 取小鼠数只，依次放在热板上，密切观察，记录痛阈值。

凡在30s 内不舔后足或逃避者皆弃之不用，将合格的小鼠随机分成两组，列入表内。

3 给药及药后痛阈值的测定 第一组小鼠腹腔注射某药（0.1ml/10g ），第二组小鼠腹腔注射同容量的生理盐水作对照。

给药后30min 、45min 各测痛阈值一次（如60s 内无反应，应将小鼠取出，以免把脚烫伤，痛阈值按60s 计算）。

将两次测得的平均值作为药后痛阈值（即观察值X ）进行t 检验。

4 t 检验 显著性检验中，两组均数的显著性检验最常用的是t 检验。

一般分三步：第一步：检验假设，比较两组均数的差异有无显著性时，首先假设差异是不显著的，即两组平均数无本质区别，差异可能是由抽样误差引起的，这样假设在统计学上称为“无效假设”。

第二步：计算t 值，进而求得概率（P 值）。

公式：nX X ∑=2121S X X t --=2121221n n n n S S C +⋅=- 2])([])([2122222121212-+-+-=∑∑∑∑n n n X X n X X Sc式中，X ：均数；21XX S -：两组均数的标准误；Sc 2：两组均数的标准差；n ：例数；∑：总和；第三步：判断结果，查“t值表”，t值越大P值越小，但t值的大小又与自由度有关。