245 185 140 100
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
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吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
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不同种类膜的 BSA结合能力
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为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
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❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
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❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
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蛋白结合到固相材料上
❖ 蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 ❖ 取决于
▪ 蛋白溶液扩散到固相表面 ▪ 蛋白从溶液中分离出来 ▪ 蛋白吸附到固相上 ▪ 蛋白重排到最低能态
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推荐的起始缓冲液
❖10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
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缓冲液的基本成分
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
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❖蛋白质疏水性状和亲水性状
当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常 稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
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❖静电作用力
静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用 力
❖疏水作用力
疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏 水基团相互接近. 而形成的一种作用力。对 维持分子的三、四级结构起着重要的作用。 每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
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影响蛋白结合的因素
▪ 蛋白缓冲液 ▪ 使用的膜 ▪ 蛋白自身 ▪ 应用体系
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一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
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硝酸纤维膜生产工艺图
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蛋白缓冲液
❖没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
❖作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶性, 提高稳定性
❖定律:
“蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越 强”
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胶体金诊断试剂工艺 配方原则
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内容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
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孔径定义的问题
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孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
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缓冲液的优化
❖ 离子强度
▪ 对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
❖ pH
▪ 蛋白在等电点最不稳定
❖ 沉淀剂
▪ 通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。