6.根据管底细胞量的多少，加入新配制的固定液0.3~ 0.8ml，用吸管打均匀，使其形成细胞悬液。
7.滴片：将预冷的载玻片（0℃冰浴），水平或倾斜45°角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8.染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗高倍镜和油镜观察染色体形态，统计染色体数目。可见小鼠的40条染色体呈紫红色。
三、实验小结
四、
（一）思考题
1、统计小鼠2N染色体数目，仔细观察其形态特征。
答：小鼠体内2n染色体数目为40条，形态上多为中部着丝粒染色体。
2.低渗液起什么作用，在使用过程中应注意什么问题？
答：低渗液的作用是使细胞充分吸水膨胀而不破裂，从而一直保持在胀得很大而又没有破裂的状态。进而使得细胞内的中期染色体就能够足够分散开来，从而使得经固定等步骤后仍然处于膨胀状态。之后经过滴片时的摔打和骤降温过程，使细胞及其核很快破碎，染色体进一步分散开。在滴片的时候就能够获得一团仅属于一个细胞的分散的中期染色体的片子，易于在显微镜下观察和对染色体进行计数。使用时应该十分注意适当的低渗时间和温度，以及低渗液的浓度。
（二）注意事项
1、处死小鼠的时候要果断。这次实验采用断颈法杀死小鼠，按住头部后要用力拉。出于人道主义和对实验对象的尊重，我们都应该让小鼠在最少的折磨中死去。
2、取骨后要清理干净。
3、注射低渗液的时候要注意看，如果液体从针头入口出来，说明头没有剪开，应该再剪一次。
4、低渗液处理时间可以长一点。
5、第二次加固定液是1ml而不是书上写的5ml，实验结果，加1ml和加5ml区别不大，但从节约的角度，选取1ml。
三、实验方法步骤
1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g体重）。即用以上配制的秋水仙溶液按每10g体重注射0.1ml。注射后24小时，可以取骨髓。
处死：断颈法处死小鼠。剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨的髋面，将吸有2.2%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。
生科院实验楼遗传学实验室
一、实验预习
1、实验目的
（1）学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。
（2）观察小鼠染色体的形态特征,统计细胞的染色体数目。
2、实验设备及材料
（1）器具：注射器（1ml，5ml各一支）、托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。
（2）药品：0.15mg/ml秋水仙素，1%柠檬酸三钠，固定液（3份甲醇，1份冰乙酸，临用时现配），Giemsa染液，2.2%柠檬酸钠，0.01M磷酸缓冲液（PBS）pH6.8。
低渗：将细胞悬液在1000rpm/min离心5min，弃除上清液，留0.5ml摇匀。向细胞液中再加入1%的柠檬酸三钠溶液5ml用吸管轻吹打均匀，在室温低渗30min。低渗期间，配制固定液，即甲醇：冰醋酸为3:1（v/v)，置4℃冰箱中备用。
4.预固定(1次)：低渗处理后的细胞悬液离心5分钟，留1ml原液，摇匀。加入新配制的固定液至6ml，吹打均匀，固定5分钟，再在1000rpm/min离心3-5min，去掉上清液。固定（2次）：沿离心管壁慢慢加入新配制的固定液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min，1000rpm/min 3min，弃去上清；如此反复固定两次（共固定3次）。
（3）购买小鼠（体重30克最佳；尽量雌雄各半）
（4）溶液配制：
2.2%柠檬酸三钠：称11g柠檬酸三钠到500ml蒸馏水中，充分溶解；
1%柠檬酸三钠：取5g柠檬酸三钠溶解到500ml蒸馏水中，充分溶解；
PBS（pH6.8): A液：取Na2HPO4 12g溶于500ml蒸水中，充分溶解；
B液：取KH2PO4 4.55g溶于500ml蒸水中，充分溶解；使用时A、B液等体积混合，即为pH6.8的PBS；
0.15mg/ml秋水仙素：取秋水仙素15mg溶于100ml 0.85%生理盐水中，混匀；
75%酒精：取375ml 95%乙醇，加入125ml馏蒸水；
二、实验原理
骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。因此可以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
本科学生实验报告
姓名＿许丽珍104120236＿＿学院＿生命科学学院＿＿＿
专业＿应用生物教育技术＿＿＿班级＿10级A班＿＿
实验课程名称＿遗传学实验＿＿＿＿＿＿＿＿＿
指导教师及职称郭锡汉＿＿＿＿＿
开课时间2012至＿2013学年＿二＿学期
云南师范大学教务处编印
实验名称：小鼠骨髓制备与观察细胞染色体
实验时间：21021年11月9号
6、滴片要高。
7、找到好的视野后要记住它的位置，方便显微摄像。
指导老师评语及得分：
签名：年月日