利用基因芯片进行杂交测序的原理
• 基因芯片技术与生物传感器的结合应用
• 基因芯片技术在分子免疫学中的应用
• 基因芯片技术在基因表达谱测定中的应用
• 基因芯片技术在突变检测及多态性分析方面用
• 利用基因芯片进行杂交测序 基因芯片不仅可对大量基因或序列同时、 快速进行定性、定量分析，而且作为一种极有发 展前途的测序策略也倍受人们的重视。 以图5为例，首先将八聚体寡核苷酸所有可 能的序列组合合成或固定于片基上，对于每一序 列其在片基上的位置是预先决定好的。样品扩增 并经标记后与片基上所有序列进行杂交反应。这 样，就会出现特定的杂交图谱，有杂交信号部位 的寡核苷酸片段与待测样品序列是互补的最后分 析产生杂交信号的寡核苷酸序列的重叠情况进而 推导出样品的核酸序列。
片基 钢性片基如玻片、 半导体硅片等 薄膜片基如 NC、 Nylon 膜等 探针固定方式 原位合成（in situ synthesis） 预先合成后点样 (off-chip synthesis) 探针密度 高 低 显色及检测方式 荧光，激光共聚焦扫描、 定量分析；生物传感器等 荧光
不过，也有人(Robert S. Matson)等以聚丙烯膜为支 持物用传统的亚磷酰胺固相法原位合成高密度探针序列。
DNA 样 品 TATGCAATCTAG 与基因芯片上 65,000 种可能的 八聚体进行杂交从而形成特定 的结合图形 1 ATACGTTA CGTTAGAT 22 GTTAGATC
4 CGTTAGAT 4 ACGTTAGA 33 TACGTTAG ACGTTAGA 5 GTTAGATC 1 ATACGTTA 3 4 2 5 TACGTTAG ACGTTAGA CGTTAGAT GTTAGATC 计算机分析杂交图象 并由探针的重叠情况 推导样品的核酸序列 互补序列为：ATACGTTAGATC 样品序列为：TATGCAATCTAG
五、基因片的主要类型
基因芯片以其片基(substrate)的不同可以分 为无机片基和有机合成物片基。前者主要包括半 导体硅片和玻璃片，其上的探针主要以原位聚合 的方法合成，后者主要有特定孔径的硝酸纤维膜 和尼龙膜，其上的探针主要是预先合成后通过特 殊的微量点样装置或仪器滴加到片基上去。
基因芯片的主要类型及其简要特点
三、基因芯片的基本构造
探针 支持物
外观
剖面图
平面局部放大
1.支持物：如玻片、硅片、NC膜、Nylon膜
2.探针：高密度的探针序列按照一定的次序固定 在支持物上，每个位点的序列是已知的
四、基因芯片当前研究状况
现在全世界已有十多家公司专门从事基因芯片 的研究和开发工作，而且已有较为成型的产品和设 备问世。这些公司主要以美国的Affymetrix公司为 代表，该公司聚集有多位计算机、数学和分子生物 学专家，其每年的研究经费在一千万美元以上，且 已历时六七年之久，拥有多项专利。产品即将或已 有部分投放市场，产生的社会效益和经济效益令人 瞩目。
早在八十年代初有人就曾设想利用计 算机半导体技术生产基因芯片以对人类基因 组大量的遗传信息进行分析和检查，但直到 光引导原位合成 (light-directed in situ synthesis)高密度探针技术和激光共聚焦显 微扫描问世之后才使该设想逐步成为现实，
并迅速应用到分子生物学的多个领域，得到
基因芯片技术
State-of-the art* 许呈库
* Graham Ramsay,
一基因芯片的基本概念及发展经过
基因芯片 (Gene chip) 又称 DNA 芯片（ DNA Chip ）或生物芯片 (Biological chip ， 不过该词尚包括肽芯片等其它类型 ), 它 是指将大量探针分子固定于支持物上， 然后与标记的样品进行杂交，通过检测 杂交信号的强度及分布进而对靶分子的 序列和数量进行分析。
了科学界的高度重视。
二基因芯片技术与传统杂交检 测方式的比较
•基因芯片技术
传统杂交方法 操作 简便 复杂 自动化程度 一次可检测的序列个数 很高 很低 极大 很小 总体效率 很高 很低
基因芯片技术从本质上说与 Southern Blotting 或 Northern Blotting 相 同 （ 所 以 Affymetrix 曾 与 Southern就专利问题产生冲突），只是探针密度极高 而已。不过，为此花费了大量的人力物力从事研制工 作。当然，其结果也很是诱人。
六、基因芯片检测原理及简要过程
T7 promoter PCR
体内转录
T7 promoter
荧光素
片段化
1.5 小时
杂交、冲洗
ACGT
扫描分析 1 小时
图 2 样品处理与检测过程简图
基本过程
–用生物素标记并经扩增（也可使用其它放大技术）的 靶序列或样品然后再与芯片上的大量探针进行杂交 –用链霉亲和素 (streptavidin) 偶联的荧光素（常用的 荧光素还有lassamine 和phycoerythrin）进行显色 –图 象 的 采 集 用 落 射 荧 光 显 微 镜 (epifluorescence microscope) 、激光共聚焦显微镜或其它荧光显微装置 对片基扫描 –由计算机收集荧光信号，并对每个点的荧光强度数字 化后进行分析。