1. 基于荧光定量PCR技术的检测
项目名称
EGFR基因突变 KRAS基因突变 BRAF基因突变
PIK3CA基因突变 病原体核酸定量
ERCC1\ RRM1表达量分析
检测意义
EGFR-TKI靶向筛选 EGFR-TKI靶向筛选 恶黑、甲状腺癌靶向筛选、 肠癌预后预测
肠癌、乳腺癌预后预测
EBV、HBV拷贝数 诊断、复发监测
分子诊断的临床应用 现状和展望
分子诊断技术及临床应用
Bridging a Historical Divide
临 床诊断
组织 / 器官 生理-病理学 分子诊断
细胞生物学
蛋白 RNA DNA
分子生物学
蛋白 RNA DNA
药物
转归 预后
3
精准治疗对分子诊断整体需求
正常对照
基因型、表型 传统的流行病学调查
3. 基于序技术的检测
技术名称
检测项目
检测意义
测序
EGFR
EGFR-TKI靶向筛选
CKIT、PDGFRA UGT1A1等SNP
Imatinib靶向筛选
CPT-11等化疗毒性预测
片段分析技术
NORCH1、FWT7突变 IDH1突变 微卫星不稳定性检测
儿童T细胞淋巴瘤预后预测 间变胶质母细胞瘤预后预测
00
12
24 36
48
60 72
死亡时间 (月数)
Seshadri R et al. J Clin Oncol 1993;11:1936–42
00
24
48
72
96 120 144
死亡时间 (月数)
Ross JS, Fletcher JA. Stem Cells 1998; 16: 413–428
2007 NCCN 治疗指南－HER2检测的原则
重新检测
-
+
FISH 重新检测 +
赫赛汀® 治疗
赫赛汀® 治疗
FISH
+
赫赛汀® 治疗
消化系统肿瘤
肠癌
KRAS/BRAF/PIK3CA/PTEN
MSI、MMR
UGT1A1 15基因表达
靶向筛选
遗传筛查
胃癌
HER2 C-met FGFR2
GIST
C-KIT PDGFRA
化疗预测 预后生存
HER-2扩增患者无病生存期缩短
无病生存概率 累计生存率
淋巴结阳性
淋巴结阴性
100
1.00
80
HER2 基因 <3 拷贝数
0.75
无扩增
60
HER2基因 ³3 拷贝数
0.50
扩增
40 基因扩增: >10 拷贝数
无基因扩增: <3拷贝数
20
对数秩检验 p=0.001
0.25 临界值: 不包括
Log rank p<0.001
肝癌
HBV-DNA HCV-RNA “老靶新用“
NCCN指南提及的与肠癌治疗相关的分子指标
2期肠癌5FU化疗预测 Lynch综合征筛查
毛细管电泳技术 淋巴瘤Ig、TCR基因重排 淋巴瘤辅助诊断
4. 基于高通量技术的检测
技术名称
检测项目
基于基因芯片技 19个基因 术的肿瘤多基因 突变分型检测
二代测序
BRCA1/2、APC突变 基因组测序
基因突变套餐式检测
检测意义
靶向筛选
风险预测
乳腺癌分子诊断与个体化治疗
铂类、紫杉醇疗效预测
2. 基于FISH技术的检测
检测项目 HER2扩增 EGFR拷贝数 ALK断裂 N-myc扩增 1p、19q缺失 尿路上皮脱落细胞染色体异常 BCR-Abl融合 hTERC扩增 SS18断裂 IGH/BCL2染色体易位 EWS断裂 PAX3-FKHR易位
检测意义 herceptin靶向筛选 EGFR-TKI靶向筛选 Crizitinib靶向筛选 NB预后 胶质瘤辅助诊断、用药指导 血尿筛查 慢粒辅助诊断、Imatinib靶向筛选 CIN转归 滑膜肉瘤辅助诊断 淋巴瘤辅助诊断 PNET辅助诊断 腺泡状横纹肌肉瘤辅助诊断
HER2 基因检测结果示意图
统计Ratio值（计数浸润性部 分的30个细胞）
▪ HER2基因未扩增（ Ratio <1.8） ▪ 多体性不扩增（ Ratio <1.8） ▪ HER2基因扩增 （ Ratio >2.2或排列呈簇状） ▪ 多体性扩增（ Ratio >2.2）
Her-2基因无扩增情况
▪ 癌症的个体化治疗。个体化治疗是“分子医学”时代的特 点。某种药物只对有着特定基因变异的特定患者群有疗效。 确定不同癌症患者的分子改变，在选择治疗方案时真正做 到“对症（分子）下药”；
▪ 癌症个体化治疗（靶向治疗）的前提就是明确肿瘤的特异 靶基因变异类存在与否和变异类型。
临床常用分子诊断技术
▪ 免疫组织化学（IHC）技术－检测蛋白 ▪ 分子原位杂交－DNA，RNA ▪ 荧光原位杂交（FISH）技术－DNA，RNA ▪ 荧光定量PCR－DNA，RNA ▪ DNA测序技术－DNA突变 ▪ 生物芯片技术－DNA，RNA，蛋白质等
肿瘤风 险预测 模型的 建立
肿瘤早期干预
隐匿病例 确诊病例
基因型、表型 临床病理因素 治疗疗效数据 预后随访信息
预后预测
治疗方案选择
药物疗效预 测
药效学评估
药物选择 治疗剂量调整
分子诊断与个体化治疗
▪ 癌症分子诊断和分型。随着人类基因组计划完成、 HapMap计划和蛋白组计划的进行而产生了新的学科和 临床诊疗手段，利用基因结构和表达变化，在分子水平上 对癌症进行诊断和分类；
×40
×100
浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：++ FISH：Ratio>5，中度扩增
免疫组化（－）与FISH扩增阳性
肿瘤细胞不着色
×40
浸润性导管癌Ⅱ级
×100
IHC：－
FISH：呈簇状扩增
我院已完成HER2检测1140病例小结
推荐HER2检测流程
IHC
肿瘤标本 （石蜡包埋）
0/1+
2+
3+
-
FISH
红信号数>2，同时绿信号非整倍体 R<1.8，无扩增
红信号与绿信号 均为两点，R=1
免疫组化（3+）与FISH对比
>30%的肿瘤细胞全部 的细胞膜高强度着色
×40
住院号：177319 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：+++ FISH：呈簇团状高度扩增
×100
免疫组化（2+）与FISH对比
>30%的肿瘤细胞全部 的细胞膜弱至中等着色
▪ Her-2基因扩增； ▪ Top-2A基因缺失和扩增； ▪ ER, PR表达与内分泌治疗； ▪ BRCA1、BRCA2基因突变检测； ▪ ERCC1等基因表达定量分析；
乳腺癌
---关爱她人
靶向筛选 HER2
易感筛查
BRCA1/2
化疗预测 TOP2A
21基因 表达谱
实现筛查、治疗、预后评估综合防治目标