实验七气相色谱仪原理和使用
一、目的要求
1、掌握气相色谱仪结构、工作原理和内标法应用。

2、熟悉气相色谱仪的操作
3、了解气相色谱法在中药分析中的应用。

二、基本原理
仪器工作原理图
样品测定原理
牛黄解毒片由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草组成。

其中冰片为龙脑和异龙脑的混合物，具挥发性。

因此本实验采用GC法，对牛黄解毒片中所含冰片进行测定，并用内标法计算含量。

三、仪器与试药
1、气相色谱仪GC9800F（上海科创色谱仪器有限公司）、微量进样器。

2、水杨酸甲酯、乙醚、醋酸乙酯（AR）。

3、冰片对照品（中国药品生物制品检定所）。

4、牛黄解毒片（市售品）。

四、操作步骤
1、讲述仪器结构：N2钢瓶、空气钢瓶、氢气发生器，气体净化器；进样器、橡
胶垫片、衬管；柱温箱、毛细管柱、分流管、尾吹管；FID检测器
2、讲述仪器操作（详见附录）：
（1）顺时针打开氮气和空气钢瓶、接通氢气发生器电源。

（2）接通仪器电源。

（3）设置气化、柱箱、检测器温度，并运行。

（4）确定各气体流量。

（5）打开FID电源，设置灵敏度和衰减。

（6）打开电脑，打开N2000在线，选择通道1，设置方法、信息等。

（7）查看基线。

（8）点火。

（9）待基线稳定后进样。

（10）进入N2000离线，查看色谱图和数据。

（11）记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。

（12）利用内标法进行样品溶液浓度的计算。

（13）柱的老化。

（14）关机
3、样品分析
色谱条件以二甲基聚硅氧烷（SE-30）为固定相；柱温为130℃，气化室为200℃，；
载气为N
2；柱前压0.06MPa；H
2
0.03MPa（20ml/min）；空气0.03MPa；尾吹0.03MPa；
FID检测器，控制温度200℃。

校正因子测定
内标溶液配制取水杨酸甲酯0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为内标溶液(2mg/ml)。

（已备）
对照品溶液配制取冰片对照品20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加内标溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液(2mg/ml)。

（已备）
测定校正因子取冰片对照品溶液1μl注入气相色谱仪，测定3次，计算校正因子。

测定法取本品6片，去薄膜衣，研细，取0.5g，精密称定，置15ml带塞试管中，加入乙醚10ml，密塞，冰水浴超声提取10min。

提取液分两次转移至8ml 离心管中，离心（3000rpm，10min），倾出上清液，沉淀用5ml乙醚洗涤1次，离心，合并上清液，挥干，残渣用内标溶液溶解，移置10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

精密吸取1μl，注入气相色谱仪，测定，按内标法计算含量。

（已备）
附GC9800F气相色谱仪的操作步骤
1、打开载气（N2）、空气气瓶，减压至0.3-0.4MPa，开启氢气发生器，确认整个
气路系统不漏气。

2、打开仪器电源，从温度控制器面板输入柱箱（130℃）、气化室（200℃）、检
测器温度（200℃），然后按“启动”键。

3、打开气阀（位于温度控制器右上方），调整载气（N2）、空气，氢气的压力和
流速，（实验前均调好，因仪器调钮严重滞后，老师学生一般实验时不要轻易动调钮）。

4、打开FID电源，选择FID灵敏度（109Ω→2档）和信号衰减（1）
5、打开微机开关，调用N2000气相色谱在线分析程序，输入相关的信息（选择
通道1、实验信息、方法等），进入数据采集窗口。

6、按下“查看基线”按钮(数据采集窗口靠右侧第一个按钮)，考察基线是否平
稳。

7、基线平稳后，检测器温度高于100℃后，即可点火（点火口位于温度控制器
顶部）。

点火后，基流变小，即基线降低。

关闭点火开关。

8、待基线再次平稳后，按“斜率测试”按钮（数据采集窗口靠右侧第五个按钮），
进行斜率检查，进样分析，进样口位于温度控制器顶部。

进样的同时，按下“数据采集”按钮（数据采集窗口靠右侧第二个按钮）。

9、进入N2000离线，查看色谱图和数据。

10、记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。

11、利用内标法进行样品溶液浓度的计算。

12、柱的老化：设置柱温200℃，恒温20分钟。

13、关机顺序：
a)关闭氢气阀（熄火）、氢气发生器、空气，重新打开氢气阀（排除剩余氢
气）。

b)设置柱温50℃，待恒温后关机。

c)关闭载气。