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透射电镜制样流程

透射电镜样品制备过程
组织取材(60s内),体积<1mm3,之后进行如下步骤
1)前固定:3%戊二醛2h或过夜。

2)漂洗:磷酸缓冲液,3次,10min/次。

3)后固定:1%锇酸固定液,2h。

4)漂洗:(同上)。

5)梯度脱水:50%丙酮,70%丙酮,80%丙酮,90%丙酮两次,各10min 。

100%丙酮两次,各15min。

6)渗透:丙酮/包埋剂(1:1,1:2),室温各1h。

丙酮/包埋剂1:3, 4度过夜。

纯包埋剂,4度过夜。

7)包埋:纯包埋剂(37度,45度,60度各24h)。

取出包埋块,进行超薄切片,片厚70nm。

分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min,双蒸水漂洗3-5次,之后用柠檬酸铅
染色10min,双蒸水漂洗3-5次。

待切片干燥后,透射电镜观
察。

切片机型号:Leica UC7 超薄切片机,速度1mm/s.
透射电镜型号:日立高新HT7700,电压80kv 电流10μa.。

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