手足口病病毒核酸检测结果分析
[摘要] 目的通过手足口病病原体核酸检测，掌握眉山市2011年手足口病流行状况，为手足病预防和控制提供实验依据。
方法收集2011-03/12间351例手足口临床诊断病例患者咽拭子标本，采用Real-time RT-PCR检测手足口病病原体核酸。
结果在351例患者咽拭子标本中，178例检测结果为阳性，其中135例为肠道病毒71型（EV71）阳性（75.84％）；36例为柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）阳性（20.22%)，7例为其它肠道病毒阳性（3.93%），3～12月份均有病例报告，5、6月为发病高峰，发病年龄以4岁以下儿童（94.94%）为主，男女性别比为（1.54:1）。
结论2011年手足口病病原以EV71型为主，5、6月为发病高峰，以4岁以下儿童发病为主。
手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)是由多种人肠道病毒引起的常见传染病，以婴幼儿发病为主。
大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。
少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，易发生死亡。
引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒7l型(EV71)和柯萨奇病毒A组(CoxA)、埃可病毒(Echo)的某些血清型，EV71感染引起重症病例的比例较大。
肠道病毒传染性强，易引起暴发或流行[1]。
近年来随着手足口病报告数的不断上升，手足口病防控形势十分严峻，目前手足口病实验室主要采用实时荧光PCR检测病毒核酸，此法快速、灵敏，特异强，弥补了普通PCR易污染和病毒培养分离耗时长的缺点。
本文以实时荧光PCR方法对收集到的2011年351份临床诊断为手足口病的标本进行肠道病毒核酸进行检测，以期了解眉山市手足口病的病原学特征，为手足病预防和控制提供实验依据。
作者单位：眉山市疾病预防控制中心（四川眉山620010）
作者简介：杨俊英（1966-），女，大专，主管检验技师，微生物检验
1. 对象与方法
1.1 对象按照《四川省手足口病防控方案》要求，采集全市3-12月份临床诊断为手足口病病例（发病3日内）的咽拭子标本，共351份。
1.2 检测方法按照卫生部手足口病预防控制指南(2009版)要求，对手足口病人的咽拭子标本采用RT-PCR检测手足口病病原核酸。
1.3 检测试剂核酸提取试剂选用MagNA Pure LC Total NA Kit-HP（194，罗氏全自动核酸提取）；Real-time PCR(RT-PCR)法选用上海之江公司生产的肠道病毒通用（EV）、肠道病毒71型（EV71）及柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）RNA检测试剂盒。
1.4 检测设备MagNA Pure LC
2.0全自动核酸提取仪、博日Real-time PCR（RT-PCR）仪。
1.5 RT-PCR 反应条件及结果判断逆转录及变性：45℃10 min，95℃15 min；扩增及荧光收集：95℃15 s，60℃60 s，共40个循环，在60℃收集FAM荧光信号。
根据Ct值判断结果，Ct值小于38的检测标本判断为病毒核酸阳性标本。
2 结果
2.1 手足口病病原特征2011年手足口病核酸检测咽拭子样本共351例，其中普通病例样本341例，临床诊断重症样本10例（死亡1例），在351例患者咽拭子样本中，178例检测结果为阳性，总阳性率为50.71%，其中EV71阳性135例，占总阳性的75.84%；CoxA16阳性36例，占总阳性的20.22%，其它肠道病阳性7例，占总阳性的
3.93%。
临床诊断重症样本10例，经实验室诊断阳性9例，占总阳性的5.06%，其中EV71阳性8例（1例死亡），占重症总阳性的88.89%，CoxA16阳性1例，占重症总阳性的11.11%。
结果显示：2011年眉山市手足口病流行病原以EV71为主，而EV7感染更易表现为重症。
2.2 手足口病阳性标本的分布特征
2.2.1 时间、性别及年龄分布全市3～12月均有病例报告，5、6份为发病高峰，有94例阳性标本集中在5月和6月（52.81%）（表1）；年龄最小为2个月，最大为9岁，阳性标本以4岁以下儿童最多（94.94%）（169/178）（表2）；178阳性标本中男性108例，女性70例，性别比为1.54:1，男性明显高于女性。
男性标本共采集204份，EV71、CoxA16和其他肠道病毒阳性数分别为82、23和3份；女性标本共采集147份，EV71、CoxA16和其它肠道病毒阳性数分别为53、13和4份；不同性别的肠道病毒构成比和总的阳性率经χ2检验无统计学差异（χ2=1.09, P﹥0.05，χ2=0.97, P﹥0.05）。
3 讨论
全市351例手足口病临床诊断标本中，178例实验室检测为阳性，其中EV71占75.84%（135/178），说明眉山市2011年手足口病原以EV71为主，与全省网络直报一致。
10例重症病例中EV71阳性8例（1例死亡），占重症总阳性的88.89%，本结果显示重症病例以EV71病毒感染为主，进一步证明EV71传染性强，致病率高，易引起神经毒性，侵犯肺、心、脑，使一些患儿病情进展快，易发生死亡[2～3]，应用RT-PCR快速检测手足口病病原核酸[4]，可实时监测本地手足口病病原流行情况，及时采取防控措施，以减少重症和死亡病例的发生。
手足口病四季均可发病，春末夏初易发生流行，冬季发病较少。
本结果显示2011年全市3～12月均有发病，发病以5～6月份为高峰，80%重症病例的时间分布也集中在此期间。
发病年龄以4岁以下儿童为主（94.94%），表明婴幼儿抵抗力低，需要特别加强对4岁以下儿童
手足口病病原的监测，及时发现病例，及早采取隔离措施，阻止疾病传播。
阳性标本中男女比例1.54:1 ，男孩发病明显高于女孩，与手足口病主要是经粪-口和呼吸道飞沫传播，病毒易通过污染的手、食品、日常用品传播，且男孩相对好活动，更易被感染有关[5]
综上所述,由于HFMD至今仍无有效的疫苗和特异性治手段，因此应用RT-PCR快速检测手足口病病原体核酸，掌握其病原体流行特征，为手足病预防和控制提供重要的实验依据，以减少HFMD的暴发流行，降低重症和死亡病例的发生。