［ １ Ｔ Ｕ Ｋ Ｎ Ｎ Ｊ Ａ Ｏ Ａ Ｒ ， Ｖ Ｘ Ｘ Ｅ ． Ｃ ｌｉ ｉ １ ］ Ｕ Ｋ Ｏ Ｅ ，Ｊ Ｌ Ｖ Ａ Ａ Ｐ Ａ Ｎ Ｎ Ｎ Ｋ ａｃ０ｎ ｔ ｔ ａ ｎ ｆ ｍ ｂｌａｉ ｓ ｏｏｏｉ ｉ ａｓ Ｊ ．Ａｃ ｈ ｓ ｌ ｒ ｔ ｔ ｍｏｉｚｔｎｏｔ ｐｒｓ ｎ ｒ ［ ｅ ｍｅ ｏ ｉ ｉ ｏ ｅ ｓ ｔ １ ｔ Ｐ ｙｉ ａ ｏ Ｓａｄ ９ ０， ４ （ ） １ ｅｎ ，１９ １ １ １ ：１９—１４ ２．
普通 季节性 流感进行鉴别 区分 。
１ 材 料 与 方 法
ｎ Ｎ Ｈ１ １与 Ｈ Ｂ混合 ，Ｈ Ｎ ｓ １ Ｉ与 ｓ ３ ２混 合 ，Ｈ１ １与 ＨＮ ｓ Ｎ Ｈ Ｂ混合 ，Ｈ Ｎ ｓ ３ ２与 Ｈ Ｂ混 合 ，Ｈ Ｎ 、Ｈ Ｎ ｓ １ １ ｓ ３ ２与 Ｈ Ｂ混 合 ，Ｈ１ Ｉ ｓ １ １ ｓ ３ ２与 Ｈ ｎ Ｎ 、Ｈ Ｎ 、 Ｎ Ｈ Ｂ混合 ， 每个管内加入 ４
ｉ ｅ ｅ ｔ ｎｈ ｃ ｏｌ ｈ ｒ Ｊ ．Ｃｉ Ｃ ｅ ｎ ｒ ｌｉ ｓｉ ｉ ｓｈｏ ｃｉ ｅ ｔｒａｏ ｐ ｎ ｄ ｎ［ ］ ｌ ｈｍ，１９ ，４ ｎ ９７ ３
（ ） ５ ７—１ ８ ． ９ ：１ ７ ５ １
［ ５］ 宫琳 ， 周延 民，李春艳 ，等．快速建立兔骨质疏松症动物模型 的方法［ ］ Ｊ ．吉 林 大学 学报 ：医学 版 ，２ ０ ０ ８，３ ５） ０ ４（ ：９ ３—
ｅ ｅ ｔｏ ｓｄ ｆ ｎ ａ ｍｉ ｉｔ ｒ ｄ ｓ ｂ ｕ ａ ｅ ｕ ｌ ｏ ｒ ｔ ｕ ｎ ｆ ｃ ｆｋ ｉ ｉ ｄ ｎ ｓｅ ｅ ｕ ｃ ｔ ｎ ｏ ｓｙ ｔ ａｓ ｄ ｒ ｇ ｉ ｏ ｉ ｍｍｏ －
ｏｇｎｚｔ ｎａ ｄａ ｈｓ ｎ Ｊ ．Ｂ ｎ ， ０ １ ４ （ ： ６ ９ ４ ｒａｉ ｉ ｎ ｄｅｉ ［ ］ ｏｅ ２ １ ， ９ ５） ９ ５— ７ ． ａｏ ｏ ［ ］ Ｃ ＯＦ Ｏ ＷＡ Ｅ ＪＣ，Ｔ Ｙ Ｏ Ｒ，ｅ ａ．Ｓｒｍ ｃｎ ４ Ｒ Ｆ Ｎ Ｐ Ｍ， Ｄ Ａ Ｌ Ｒ Ｍ ｔ １ ｅ ｏ— ｕ
ｅ ｏ ｒ ｖ ｔ ｎ ｏ ｔｏ ｌ ｓ ｏ ｅ ｒ ｓ ｒ ｔｏ ｎ ｓｅ ｂ ａ ｔ ｃ ｔｓ ｅ ｅａ ｒ ｇ ａ ｉ ｏ ｓｅ ｃａ ｔ ｂ ｎ ｅ ｏｐ ｉｎ ａ ｄ ｏ ｔ ｏ ｌｓ ｙ ｏ ｋ ｌ ｔ ｙ ｌ
ｐｏ ｅｒ，ａｄｃａｇｓ ｕ ｎ ｋｌｔ ｔｒｔ ｎ ］ ｎｔ ｅ ， ｈｍ ｔ ｙ ｎ ｈｎ ｅ ｒ ｇｓｅ ａ ｍａ ａｉ ．Ａ ａ Ｒ ｃ ｄｉ ｅｌ ｕ ｏｌ Ｊ
性 强 ， 用 于人 类流 感病 毒 的 鉴 别 分 型 检 测 。 可
【 关键 词 】 人 流感 ； 甲型 Ｈ１ １ 新 Ｎ ；多重 Ｐ Ｒ； 测 Ｃ 检
流 感 病 毒’ｉ ｕｎａｖ ｕ ） 单 负 链 分 节 段 的 （ｎ ｅｚ ｉ ｓ 是 ｌ ｆ ｒ
Ｒ Ａ病毒 ， Ｎ 病毒 的表 面抗 原 血凝 素 （ ｅ ａｇ ｔ ｉ） ｈｍ ｇｌ ｉ ｎ 和 ｕｎ 神经氨酸 酶 （ ｅｒ ｉｉａｅ 易 发 生变 异 ， 导 致其 引 ｎｕａ ｎｄｓ） ｍ 是
同时伴有季节性 Ｈｌ １ Ｈ Ｎ Ｎ 、 ３ ２和 乙型流感 的散 发。在
型 ＨＮ １ １的同时 ， 季节性 流感 病 毒 的监 测也 相 当重 对 要 。目前普遍 推荐 快 速检 测 流感 病 毒 的方 法 为逆 转
录 一聚合酶链 式反 应 （ Ｔ—Ｐ Ｒ） ｒ ｌ ｉｅＰ Ｒ， Ｒ Ｃ 和 ｅ —ｔ Ｃ ａ ｍ ｒ ｌ ｉ ｅＰ Ｒ需要 的试剂 与仪器 比较 复杂 ， ｅ —ｔ Ｃ ａ ｍ 基层疾控 部 门难 以实现 。因此 ，０ ０年 １ ２１ ２月至 ２ １ 年 １ ０１ ０月 ， 本实验 旨在建立一种适用于基层疾控部门 的多重 Ｐ Ｒ Ｃ
ｃｎｒｔｏ ｓｏ ａｂ ｘ ｌ—ｔｒ ｉａ ｒｐ ｐｉｅ ｏ ｙ ｅ ｐｏ ｏｌ— ｅ ｔａｉｎ ｆｃ ｒｏ ｙ ｅ ｎ ｌｐ ｏ ｅ ｔ ｆｔｐ Ｉ ｒｃ ｌ ｍ ｄ ａ
ｇｎ ｍｎ ｅ ．ａ ｉｏ—ｔ ｍｉａ ｐｏ ｅ ｔ ｅ ｏ ｐ Ⅲ ｐｏ ｏｌ ｅ ｒｓ ｅ ｎ ｌ ｒ ｐｉ ｆｔ ｅ ｒ ｐ ｄ ｙ ｒｃ ｌ ｇ ｎ ｃｏｓ— ａ
ｍｏ ｅｉ ｇ ｉ ａ ｒ ｂ ｅ ｌｒ ｂ ｎ ｄ ｌ ｎ ｒ ｔ ｔａ ｅ ｕ ａ ｏ ｅ： ｍｏ ｈ ｌ ｙ， ｄ ｎ ｍｉ ｉｔ ｍｏ ｎ ｐ ｏｉ ｇ ｙ ａ ｃ ｈ ｓｏ ｒ
［ Ａ Ｅ Ａ ＤＲ ２］ Ｌ Ｘ Ｎ ＥＣ，Ｖ Ｃ ．Ｐ ｔｏｈ ｓ ｌｇ ｆ ｏ ｅｌ ｓｉ ｉ ｓ ＩＯ Ｌ ａ ｐ ｙｉｏｙｏ ｎ ｓ ｄｓ ｅ ｈ ｏ ｂ ｏ ｎ ｕ ｏｔ ｐｒｓ ［ ］ ｏ ｔ ｏｅＳｉｅ ２ １ ， ８ ６ ： ７ ｓ ｏ ｏｏｉ Ｊ ．Ｊｉ ｎ ｐｎ ， ０ １ ７ （ ） ５ ２—５ ６ ｅ ｓ ｎＢ ７． ［ ］ Ｎ Ｂ Ｖ Ｋ ＡＮ Ａ Ｉ Ｃ Ｒ ＤＡ， ｔ １ ｆｃｓ ｆ — ３ ＡＡＩ Ｎ， Ｈ Ｄ Ｎ ＡＭＩＡＮ ｅ ａ．Ｅ ｅｔｏ ｍｉ Ａ，
起世界大流行 的原 因。２０ ０ ９年 ４月 ， 由墨西 哥发端 的 Ｈｌ １ Ｎ 流感 疫情在 短时 间内蔓延 至全球 ３ ０多个 国家 ，
未来数年 内 ， 预计 新 甲型 Ｈｌ １ Ｎ 流感 病 毒会作 为 季节 性病毒继续传播 ， 在高风险人群 以及健康人 中间 ， 可能
会 出现严重病 例… ， 对这 类病例 做 到早 期识 别和 及时 治疗很重要 。新 的研 究 显示 ， 甲型 Ｈｌ １与季 节性 新 Ｎ 流感发生严重并发症 的风险相 当 。可见在监 测新 甲
９ ６． ０
［２ １ ］唐学 阳，刘利君 ， 虎，等．废用性骨质疏松幼龄大 鼠骨维生 郑
素 Ｄ受体表达的研究 ［ ］ Ｊ ．四Ｊ 大 学学报 ： ｉ Ｊ 医学版 ， ０ ０ ４ ２ １， １
（） ０ １ ：１６—１０ １．
［ ］ 郑 少雄 ， ６ 蔡文仪 ， 邱明才 ， 等．血尿羟脯氨酸测定方法的改进
湖南省科技 计划 项 目（ 编号 ：０ １ Ｋ ２０ ， ２ １ Ｓ ３ ６ ） 湖南 省 出入 境 检验
检疫 局科技项 目（ 编号 ：０ ９ ｎ０ １ 长沙市科 技计划 项 目（ ２０ ｈｋ ０ ）， 编号 ：
Ｋ ９４５ ０ ０ １ ０—１ ） １
△通信作者 。Ｅ—ｍａ ：ｘｌ＠ｙｈｏ ｃｒ． ｎ ｉｗ ｅ ｌ ｘ ａ ｏ。ｏ ｃ ｎ
病毒 的多重 Ｐ Ｒ方法。方法 Ｃ
病毒特异性 片段 的多重 Ｐ Ｒ的方法。用人的 Ｇ Ｐ Ｈ基 因作 为 内参判 断标本 来源和 实施质 量控 制 的依 据。并进 Ｃ ＡＤ 行敏 感性 、 特异性和 盲样检 测评价 实验 。结 果 １６ｂ （ 甲型 Ｈ１ １ 、３ ｐ 季节性 Ｈ１ １ 、 １ ｐ 季节性 Ｈ Ｎ ） １０ｂ （ ０ ｐ 新 Ｎ ） １５ｂ （ Ｎ ） ｌ８ｂ （ ３ ２ 、７ ｐ 乙型 流感病毒 ） 。该 实验检 测新 甲 型 Ｈ Ｎ１ Ａ ｅｌｏ ａ０ ／２０ ） １ （ ／ ｏｆｍｉ ７ ０ ９ 的敏 感性为 １ ｏｉｓｇ ） ｉ ／ ０ｅｐｅ／ ，￣。特异性 实验 结果 显示每 对 引物 只检 测对 应的病毒 ， ． ３ ２份盲样检 测结果特异性好。结论 该 多重 Ｐ Ｒ方 法可同时检 测新甲型 Ｈ１ １ 季节性 流感病毒 ， Ｃ Ｎ及 敏感性 、 特异
【 摘要 】 目的
建立一种可 以同时检测人类新 甲型 Ｈｌ 、 Ｎｌ 季节性 Ｈｌ 和 Ｈ Ｎ Ｎ１ ３ ２亚型流 感病 毒及 乙型流感 根据以上 ４种流感病毒的特异 性基 因设 计 ４对引物 ， 立可 同时扩 增 出 ４个流感 建 该 方法 可 同时扩 增 出流感病毒 亚型 的 Ｈ Ａ基 因片段 长度分 别为
１８ ２ ８ １ ：１７—１５ ９４， ０ （ ） ３ ４．
［ ］ 李 明，刘植珊 ，高建 章，等．中频 电流预 防废用性骨质疏松症 ９ 的实验观察 ［ ］ Ｊ ．中华 理疗杂 志，１９ （ ） ９ ９ １ ４ ：１５—１６ ９． ［０ ＨＶ Ｔ １ ］Ｓ Ｅ ＳＶ Ｎ，Ｐ Ｋ Ｖ ，Ｋ ＢＴ Ｋ Ａ Ｏ Ｅ ｓ ｏｒ ｉ ＡＮ Ｏ Ａ Ａ Ｓ Ａ ＩＳ ＡＩ ．Ｏ ｔ ｔ ｐｃ ｅ ｏ
（ 收稿 日期 ：０ ２—０ ２ 编辑 ： ２１ ２— １ 陈嘉伟 ）
陕速 检 测 人 新 甲型 ＨＩ １ 季 节 性 和 乙型 流感 、 Ｎ
病 毒 多 重 Ｐ Ｒ方 法 的建 立 水 Ｃ
孙 菲 李 文悌 ， ，欧新 华 ，王 晓春
湖南 国际旅行 卫 生保健 中心 综合 实验 室（ 沙 ４ ０ １ ； 中南 大 学 湘雅 医 学院 医学检 验 系 （ 沙 ４０ １ ） 长 １０ ６） 长 １０ ３ ； ’ 湖南省长 沙市疾病 预防控制 中心微生物科 （ １０ １ ４００ ）
ｍａ ｅ ｒ ｔ ｔｅ ｕ ｔ ｓ ｔ ｅ ｂ ｎｅ ａ ａ ｏ ｉ ｅ ｐ ｎ ｅ ｏ ａ ｈ ｒ ｐ ｕ ｉ ｌ ａｓ ａ ｔｎ ａ ｅ ｈ ｏ ｎ ｂ ｌ ｒ ｓ ｏ ｓ ｔ ｔ ｅ ａ ｅ ｔｃ ｃ
［］ Ｊ ．中华医学检验杂志 ，１８ ， （ ） ３ ９ ３ ６ ３ ：１３—１６ ３． ［ ］ Ｚ Ｎ Ｅ Ｓ Ｂ Ｇ Ｎ Ａ ＡＥ，ｅ ａ．ＴｍｅＲ ｓｏ ｓｓｏ ７ Ｅ Ｇ Ｑ Ｑ，Ｊ ＥＷ ， Ｉ Ｏ Ｉ ｔ １ ｉ ｅｐ ｎｅ ｆ
广 东 医学
２１ ０ ２年 ９月 第 ３ ３卷 第 １ ８期 Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ｄｃｌ ｏ ｒ Ｍ Ｓｐ ０ ２， ｏ．３ Ｎ ．１ ａ ｇ ｏ ｇＭｅ ｉ ｕ ｎ ａＪ ｅ ．２ １ Ｖ １ ３， ｏ ８
・
２ ７３１ ・
参 考 文 献
［ ］ Ｔ ＲＮ Ｒ Ｒ Ｔ，Ｌ ＴＮＵ ，ＨＥ Ｆ Ｒ Ｎ Ｔ Ｅ ｉ ｓ ｄ ｌ １ Ｕ Ｅ Ｏ Ｉ ＮＳ Ｆ Ｅ Ａ ．Ｄ ｓ ｅｉ ａｕｔ ｕ ｎ
．
２３ ７２．
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Ｇ ａｇｏｇ ｅｉｌｏｒ￣ Ｓ ． ０２ Ｖ１３ ， ｏ １ ｕｎｄｎ ｄ ａＪｕ Ｍ ｃ ｎ ｅ ２１， ｏ ３ Ｎ． ８ ｐ ．