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细菌与病毒的病原学检查法PPT课件
血凝抑制试验
病毒+红细胞 血凝现象
病毒+抗体+红细胞 血凝现象消失
用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行 病学调查及鉴定病毒的型和亚型。
ELISA法:HSV、CMV、EB病毒等
蛋白印迹技术:用已知物学检查法:病原体检查,核 酸检测,抗原、抗体检测 ➢病毒感染的微生物学检查法:电镜检查,病毒 的分离培养和鉴定,核酸检测,抗原、抗体检测
病毒抗原的检测:HIV和HBV抗原
病毒核酸的检测
A
B
C
A:未感染的成纤维细胞。 B:单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。 C:呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。
五、病毒抗体的检测:
中和试验:
阳性:可能以前有过隐性感染,用于 流行病学调查。
补体结合试验:
用已知病毒的可溶性抗原检测病人血
清中有无相应抗体,作为近期感染的 指标。
三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标
细胞的变化:CPE 红细胞吸附(HAd): 红细胞凝集: 病毒干扰作用:风疹病毒,埃可病毒,Vero细
胞。
中和试验(NT):是病毒在活体内或细胞培
养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验
空斑形成试验:蚀斑形成单位(PFU),感染
性病毒的滴度用PFU/ml表示。
四、病毒成分的检测
取双份血清,抗体效价比早期高4倍以上有意
义。
二、病毒分离培养的方法
1、动物接种
常用动物:小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴
等;
接种途径:皮下、皮内、脑内、腹腔、静
脉等接种;
观察:动物出现感染症状,取病变组织进
一步检查
2、鸡胚培养:孵化9~14天的鸡胚
接种途径有:绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊
腔、卵黄囊。
第一节 细菌感染的微生物学检查法
一、细菌学诊断
形态学检查
1.普通光学显微镜检查法: 2.暗视野显微镜检查法:检查活菌、 螺旋体及其动力 3.荧光显微镜检查法:
病原菌的分离培养 生化试验 血清学鉴定:玻片凝集试验 动物实验:毒力、致病性 毒力检测:LD50、ID50,毒素 药物敏感试验:纸片扩散法
二、检测病原菌成分
抗原检测:
凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技 术
核酸检测:
1.核酸杂交技术:Southern印迹杂交、Northern印迹 杂交、原位杂交
2.PCR技术 3.基因芯片 4.16rRNA基因序列分析:编码rRNA,保守区、可变 区
三、抗体的检测(血清学诊断)
凝集试验:直接、间接、协同、冷凝集 沉淀试验:环状、絮状、双向、对流电泳 补体结合试验: 酶联免疫吸附试验(ELISA):
鉴定:血凝和血凝抑制试验
尿囊腔接种
羊膜腔接种
卵黄囊接种
绒毛尿囊膜接种
3、组织培养 器官培养、组织培养、细胞培养
细胞培养:
单层细胞培养、悬浮细胞培养; 原代细胞培养:由新鲜组织制备 二倍体细胞:二倍体性质,传40~50代,人
胚肺成纤维细胞
传代细胞系:由突变的二倍体细胞或肿瘤细
胞建立的,HeLa细胞