平板划线分离操作法示意图
平板划线菌落分离效果图
（二）其他接种方法
将有菌的材料或纯粹的菌种转移到另一无菌的培养基 这个过程就称为接种。 上，这个过程就称为接种。 常用的几种方法如下： 常用的几种方法如下： 1.在液体培养基上接种 在液体培养基上接种； 1.在液体培养基上接种； 2.在固体斜面培养基上接种； 2.在固体斜面培养基上接种； 在固体斜面培养基上接种 3.在半固体培养基上接种； 3.在半固体培养基上接种； 在半固体培养基上接种 于37℃下培养24h后观察各种菌株在不同的培养基上的培 37℃下培养24h后观察各种菌株在不同的培养基上的培 下培养24h 养特征，比较它们培养特征之间的差异。 养特征，比较它们培养特征之间的差异。
3.液体接种： 3.液体接种： 液体接种 由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等） 由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等） 中的方法。 中的方法。 操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培 操作与上法基本一致， 养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦， 养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌 体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。 体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。 如果菌种是培养在液体培养基中时， 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴 管接种。 管接种。
四个同学分别接种1种菌至四种培养基，写清楚菌种名，姓名，日期） 四个同学分别接种 种菌至四种培养基，写清楚菌种名，姓名，日期） 种菌至四种培养基
（一）纯培养 将菌悬液于肉膏蛋白胨平板上划线分离 划线分离。 1. 将菌悬液于肉膏蛋白胨平板上划线分离。 37℃倒置培养 24h后观察结果 倒置培养， 后观察结果。 2. 37℃倒置培养，24h后观察结果。
二.实验原理
微生物在自然界中无处不在。 1. 微生物在自然界中无处不在。但自然界中的微生 物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质， 物都以混杂状态存在。要研究某种微生物的性质， 首先要获得这种微生物的纯培养物。 首先要获得这种微生物的纯培养物。微生物纯化培 养的方法有：显微操作单细胞挑取法、 养的方法有：显微操作单细胞挑取法、稀释涂平板 法、稀释混合平板法和平板划线法四种。现在又发 稀释混合平板法和平板划线法四种。 展了基于其DNA和蛋白质的分子生物学分离和鉴定方 展了基于其DNA和蛋白质的分子生物学分离和鉴定方 DNA 法用于分离鉴定难以或不能培养的微生物。 法用于分离鉴定难以或不能培养的微生物。而厌氧 微生物的纯化由于其厌氧或低氧化还原电位， 微生物的纯化由于其厌氧或低氧化还原电位，要求 使用特殊的分离方法。 使用特殊的分离方法。
微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上， 2. 微生物在固体斜面、半固体和液体培养基上，不 同的微生物有其固有的培养特征。 同的微生物有其固有的培养特征。这些培养特征可 以作为微生物分类鉴定的指标，也可作为检测纯培 以作为微生物分类鉴定的指标， 养物是否被污染的指标。 养物是否被污染的指标。
三、实验操作 每组接种四种菌（大肠杆菌，变形杆菌，葡萄球菌，枯草杆菌） （每组接种四种菌（大肠杆菌，变形杆菌，葡萄球菌，枯草杆菌）
2.穿刺接种： 2.穿刺接种： 穿刺接种 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内， 用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内， （不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌 不要刺到底部），再沿原路拔出， ），再沿原路拔出 气性细菌接种、检查细菌的运动能力等。 气性细菌接种、检查细菌的运动能力等。
1.斜面接种： 1.斜面接种： 斜面接种
从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方 法。此法用于好气性微生物的接种。 此法用于好气性微生物的接种。 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放 左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 平。用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手 用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环， 的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧， 的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口 在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内， 在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷 却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直 挑菌，立即转入斜面管底部， 线。
思考题
1、接种时，为何要尽量使试管平放？ 接种时，为何要尽量使试管平放？ 2、你所做划线法是否较好地得到了单菌落?如果不是, 你所做划线法是否较好地得到了单菌落?如果不是, 请分析其原因。 请分析其原因。 3、在恒温培养箱中培养微生物时为何培养皿需倒置? 在恒温培养箱中培养微生物时为何培养皿需倒置?
实验二 微生物的纯培养
一.实验目的
1.掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术： 1.掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术： 掌握常用的分离纯化微生物的基本操作技术 连续划平板法及分区划平板法； 连续划平板法及分区划平板法； 掌握微生物无菌操作技术； 掌握微生物无菌操作技术； 2.熟悉各种微生物在固体斜面、 2.熟悉各种微生物在固体斜面、半固体和液体培养基 熟悉各种微生物在固体斜面 上的生长特征。 上的生长特征。
实验结果观察（每组四个同学一起对比观察） 实验结果观察（每组四个同学一起对比观察）
（பைடு நூலகம்天上午第四节课） 明天上午第四节课）
1、平板划线分离结果观察 是否得到较多的单菌落； 是否得到较多的单菌落； 四种菌比较观察：单菌落的大小、形态、颜色、 四种菌比较观察：单菌落的大小、形态、颜色、湿 润度、是否凸起等。 润度、是否凸起等。 2、斜面培养结果观察 观察斜面上的生长线
3、液体培养结果观察 四种菌比较观察：晃动前， 四种菌比较观察：晃动前，在液体培养基中的生长情 况（液体是否混浊、清亮、液面是否有菌膜）记录好 液体是否混浊、清亮、液面是否有菌膜） 后，晃动培养液，再观察有什么变化。 晃动培养液，再观察有什么变化。 4、半固体培养结果观察 四种菌比较观察：穿刺线是否清楚？培养基的透明度， 四种菌比较观察：穿刺线是否清楚？培养基的透明度， 培养基表面是否铺满菌苔。 培养基表面是否铺满菌苔。